Úvod
Co-immunoprecipitation, Co-IP stručně řečeno, je široce aplikovaná metoda pro stanovení fyziologicky relevantních protein-protein interakcí s využitím cílový protein-specifických protilátek nepřímo zachytit proteiny, které jsou vázány na tento specifický cílový protein. Jako rozšíření IP, Co IP to může zachytit a očistit nejen hlavní cíl, ale i další makromolekuly vazba na cíl rodilými interakce. Rozdíl mezi IP a co-IP je ohniskem experimentu. IP je zaměřen na primární cíl, který váže protilátku. Zatímco Co-IP se zaměřuje na sekundární cíle, které interagují s primárními proteiny, místo protilátky. Po imunoprecipitaci se proteiny zachycené na kuličkách promyjí a eluují za účelem získání purifikovaných primárních a sekundárních cílových proteinů. Tyto cílové proteiny mohou být charakterizovány různými metodami, jako je WesternBlot a hmotnostní spektrometr pro analýzu pod brokovnice strategie, identifikovat partnera bílkovin IDs, vazebné afinity, kinetika vazby a neobjevené funkce primární bílkovin.
Kritické faktory, o tom, Co-IP:
Jako silný technika, Co-IP je využívána pravidelně biochemici, aby prozkoumala protein–protein interakce. Zatímco metodika Co-IP je přímočará, identifikace fyziologických interakcí protein-protein prostřednictvím reakce Co-IP není snadná, kvůli nestabilitě interakce, nespecifické vazbě na IP činidla a kontaminaci protilátkami. Všechny výše uvedené problémy mohou mít negativní vliv na detekci interakcí protein-protein.
Co-IP proteinových komplexů
protože Co-IP závisí na interakcích protein-protein pro detekci vázaných proteinů, je vazebná afinita a stabilita fyziologických interakcí během celého procesu Co-IP velmi důležitá. Nedostatečná doba vazby a rozsáhlé kroky praní mohou snížit účinnost vazby a způsobit selhání detekce interakce proteinů. Proto je pro proteiny, které se předpokládá, že mají týden vazebnou afinitu nebo dynamické interakce, předem stabilizace protein-protein interakce jsou nezbytné, například, síťování procesy mohou být provedeny před Co-IP.
Nespecifické interakce
Rozbití buněčné membrány a organely, protože uvolňuje velké množství proteinů, které jsou od sebe odděleny hranicí, přijít do styku. Proto je nevyhnutelné, že mohou nastat nespecifické interakce, jinými slovy falešně pozitivní interakce,které narušují analýzu dat. To je zvláště běžné u proteinů, které mají rozložené nebo pružné oblasti, které jsou relativně lepivé a nespecificky váže jiné proteiny. Způsobů, jak prožít tyto problémy mohou být preclearance z lyzátu pomocí primární protilátky k odstranění nespecifických proteinů, a změnou iontové síly pufru pro snížení nespecifické vazby.
Creative Proteomics může poskytnout vlastní experimentální design a upřesnit parametry Co-IP na základě potřeb zákazníků. Slibujeme spolehlivou kooperativní analýzu interakcí protein-protein s našimi zkušenými vědci a techniky.
Vlastnosti Co-IP služby:
- Studium interakcí mezi proteiny a proteinový komplex
- Sledování dynamiky proteinů interakce
- Studium protein-protein interakcí v non-denaturace stavu, což je téměř fyziologické
- Mapování interakci domén proteinů
Naše Co-IP služba obsahuje:
- Experiment design založený na vaše konkrétní potřeby projektu: nárazníky, korálky, protilátky, atd.
- Parametry optimalizace, jako závazný čas
- lýzu Buňky, IP, mytí & eluční
- WesternBlot/ hmotnostní spektrometrie, v závislosti na potřeb projektu
- analýza Dat & doručení zprávy
Objednávání:
