David Weitz's Lab

Kvantifikace buněk vylučován molekul, např. cytokinů, je zásadní pro charakterizaci imunitní odpovědi. Cytokin zachytit testy, které používají inženýrství protilátek k ukotvení molekuly vylučované do vylučovat buňky jsou široce používány k charakterizaci imunitní odpovědi, protože umožňují jak citlivé identifikace a obnova životaschopných buněk reagovat. Pokud však cytokiny difundují od sekretujících buněk, budou nesekreční buňky také identifikovány jako reagující buňky. Zde zapouzdřujeme imunitní buňky do mikrofluidních kapiček a provádíme testy zachycení cytokinů v kapkách, abychom omezili difúzi sekretovaných cytokinů. Používáme mikrofluidní zařízení k rychlému zapouzdření jednotlivých buněk NK-92 MI a jejich cílových buněk K562 do mikrofluidních kapiček. Provádíme testy zachycení IFN-γ v kapičkách a prokazujeme, že buňky NK-92 MI rozpoznávají cílové buňky v kapičkách a aktivují se k vylučování IFN-γ. Kapička zapouzdření zabraňuje šíření vylučované produkty na sousední buňky a výrazně snižuje falešně pozitivních a falešně negativních výsledků, vzhledem k zkouškách prováděných bez kapiček. Ve vzorku s obsahem 1% pravda, pozitiva, zapouzdření snižuje z 94% na 2%, počet pravda-pozitivní buňky se objevuje jako negativní; vzorek obsahující 50% pravda, pozitiva, počet non-stimulované buňky se objeví jako pozitivní je snížena z 98% na 1%. Po uvolnění buněk z kapiček zůstává vylučovaný cytokin zachycen na vylučujících imunitních buňkách, což umožňuje FACS izolaci populací vysoce obohacených pro aktivované efektorové imunitní buňky. Zapouzdření kapiček lze použít ke snížení pozadí a zlepšení detekce jakéhokoli testu sekrece jedné buňky.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.