Popis
Thermo Scientific Pierce Ellmanovo Činidlo (DTNB) reaguje s sulfhydrylovými skupinami výnos barevný produkt, který poskytuje spolehlivé metody pro měření snížení cysteines a dalších zdarma sulfhydryls v roztoku.
Ellmanovo Činidlo (5,5′-dithio-bis-) se používá k odhadu sulfhydrylové skupiny ve vzorku porovnáním se standardní křivkou a sulfhydrylové-obsahující sloučeniny jako cystein. Alternativně mohou být sulfhydrylové skupiny testovány pomocí koeficientu extinkce TNB (14,150 M-1 cm-1 při 412nm). Ellmanovo Činidlo byl použit k jiným účelům, než sulfhydrylové odhad, např. pro stanovení alkylthiols pomocí HPLC za použití pre-column derivatizace řízení a ke studiu thioly v aktivním místě několika enzymů.
Vlastnosti Ellmanovo Činidlo:
• Sulfhydrylové test—reaguje kvantitativně zdarma (snížené) sulfhydrylové skupiny (—SH) na výnos zjistitelné TNB produktu
• Kolorimetrická detekce—barevný produkt umožňuje spektrofotometrické měření v kyvety nebo mikrotitrační destičky (λmax = 412nm; ε = 14,150/M·cm)
• Osvědčená metoda—no-vyznačuje chemie poskytuje kvantifikaci peptidů nebo bílkovin sulfhydrylové skupiny pomocí extinkční koeficient výpočtu nebo ve srovnání se cystein standardní
Činidla Vlastnosti
• Alternativní názvy: DTNB, Ellmanovo Činidlo
• Chemický název: 5,5′-dithio-bis-(2-nitrobenzoic kyseliny)
• Reaktivní směrem: Sulfhydrylové skupiny (—SH)
• Chemický vzorec: C14H8N2O8S2
• číslo CAS: 69-78-3
• Molekulová hmotnost: 396.35
• Forma: Žlutý krystalický prášek
DTNB reaguje s volnou thiolovou výnosu smíšený disulfid a 2-nitro-5-thiobenzoic kyseliny (TNB). Cílem DTNB v této reakci je konjugovaná báze (R—S-) volné sulfhydrylové skupiny. Proto, rychlost této reakce je závislá na několika faktorech: (1) reakce pH, (2) pKa‘ sulfhydrylové a (3) stérické a elektrostatické účinky. TNB je barevný druh produkovaný v této reakci a má vysoký molární extinkční koeficient ve viditelném rozmezí. Molární extinkční koeficient TNB byl původně hlášen Ellmanem (1959)na 13,600 M-1 cm-1 při 412 nm a pH 8,0. V důsledku toho byla tato hodnota v literatuře často citována. Pozdější studie však ukázaly, že molární extinkční koeficient je přesněji odráží hodnotu 14,150 M-1 cm-1 při 412 nm. Zánik TNB není ovlivněn změnami pH mezi 7,6 a 8,6. Zánik TNB se však u jiných rozpouštědel liší.