Experimentální a Terapeutické Medicíny

Úvod

Bronchiální astma je chronické zánětlivé airwaydisease zahrnující mnoho zánětlivých buněk a mediátorů. T buňky, zejména t pomocník (Th)1 a Th2. mají klíčovou roli vindukci zánětu dýchacích cest u astmatických pacientů (1). Komplikované imunitní odpovědi jsou schopnévyvolání deficitu Th1 a hyperaktivity Th2, což vede k nerovnováze Th1/Th2. Tato nerovnováha podporuje vylučování imunoglobulinu (Ig)a senzibilizuje mastocyty a eozinofily prostřednictvím změněcytokinové sekrece a způsobuje alergický zánět ahyper-citlivost dýchacích cest (2,3).Interferon (IFN) – γ a interleukin (IL)-4 jsou typické cytokiny th1 a Th2.

U pacientů s astma, přetrvávající airwayinflammation je iniciována antigen prezentující buňky (APC), whichintegrate různé alergeny na signál pro T-buňky a předseda jeho imunitní odpovědí (4,5).Aktivace T buněk vyžaduje signály, které jsou iniciovány prostřednictvím komplexu TCR a clusteru diferenciace (CD)28. Zralé dendritické buňky (MDC) exprimují vysoké hladiny ko-stimulačních molekulcd80 a CD86, které poskytují signál, který je nutný pro aktivaci, expanzi a diferenciaci T buněk viainterakci s CD28 (6). Předchozí studie prokázaly, že hladiny CD80 a CD86 jsou zvýšené u pacientů s astmatem (7,8).

V předchozí studie zkoumající astmatické modely,mDCs bylo prokázáno, že indukují Th2 polarizace, upregulate IL-4secretion, downregulate IFN-γ a vyvolat eosinophilicinflammation (9,10). Studie zkoumající účinky knockdown CD80 a CD86 v DCs na diferenciaci a sekreci cytokinů pomocí T pomocných buněk v murinových modelech astmatu chybí.

V této studii, ko-stimulační T-cellactivation signály byly zablokovány potlačení CD80 a CD86molecule výraz DCs pomocí malé interferující RNA (siRNA), a účinky CD80 a CD86 povalení na vyjádření úrovně z Th1/Th2 typické cytokiny IFN-γ a IL-4 byly vyhodnoceny. Potenciál CD80 a CD86 jako cíle pro aplikaci interference RNA (RNAi) v terapeutickém cílení astmatu bylvyšetřeno.

materiály a metody

Zvířata

celkem 20 zdravých myší gradebalb/c bez specifických patogenů (6-8 týdnů; průměrná hmotnost, 18±2 g) byla zakoupenacentrum pokusných zvířat univerzity Sun Yat-Sen (Guangzhou, Čína). Experimenty byly provedeny podleprotokoly schválené Výborem pro studium zvířat Sun Yat-SenUniversity.

Astma modely

celkem 20 myši byly náhodně přiřazeny k oběma uskupeními: i) astmatické skupiny, a ii) normální kontrolní skupiny.V astmatické skupiny, každá myš byla citlivější na ovalbumin(OVA; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) intraperitoneálně na dnů1, 14 a 21 a 100 µg VAJÍČEK, která byla emulgované v 20 mg kamenec(Guangzhou Chemical Reagent Co., Kuang-Čou, Čína). Následně byly myši vystaveny aerosolové výzvě 5% vajíček po dobu 30 minut / den ve vzduchotěsných nádobách (o rozměrech 50×50×50 cm) ve dnech 28-34. V normální kontrolní skupině byly myši senzibilizovány as výše uvedeným ekvivalentním množstvím fyziologického roztokumísto roztoku vaječného proteinu. 24 hodin po poslední operaci byly myši obětovány schválenou cervikální dislokací. postup prováděný kvalifikovaným a plně vyškoleným personálem. Thelungs byly odstraněny, a pak stanovena v 10% ethanolu po dobu 24 h.Vzorky byly dehydrované, vložené v parafínu, a barevné withhematoxylin a eosinem jak bylo popsáno dříve (11). Patologické změny v průduškách aplicní tkáně byly hodnoceny pod světelným mikroskopem Nikon Eclipse Ti (Nikon Corporation, Tokio, Japonsko).

separace DCS odvozených od kostní dřeně

všechny myši byly obětovány cervikální dislokací 24 hodin po závěrečné výzvě. Kostní dřeň byla propláchnuta z thefemurs a tibiae kultivačním médiem RPMI-1640 (Gibco; ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA). Po koncentrifugaci při 250 × g po dobu 5 minut byly buňky ošetřeny lýzovým pufrem redblood cell (RBC) (CWBio Co., Ltd. Peking, Čína),promyje s fosfátem pufrovaný fyziologický roztok (PBS), centrifugována při 250 × gfor 5 min a kultivovány v RPMI-1640 doplněném recombinantmouse granulocyty kolonie makrofágů stimulující faktor (rmGM-CSF;Peprotech, Inc., Rocky Hill, NJ, USA; 10 ng / ml) a rmIL-4 (Peprotech; 10 ng/ml) byly použity postupně. Po 6 dnech kultury, 1µg/ml lipopolysacharid (LPS; Sigma-Aldrich) byl přidán, a thenon-přilnavý mDCs byly sklizeny 7.den. DCs byly obarveny na 4°Cpo 30 min s fluorescein isothiokyanátem (FITC)-conjugatedhamster anti-CD11c (5 µg/ml; 11-0114), fykoerytrinem (PE)-konjugované hamster anti-CD80 (5 µg/ml; 12-0801), FITC-conjugatedrat anti-CD86 (5 µg/ml; 11-0862) a PE-konjugované rat anti-majorhistocompatibility komplexu (MHC) II (5 µg/ml; 12-5322; alleBioscience, Inc., San Diego, CA, USA) monoklonální protilátky a byly následně analyzovány průtokovou cytometrií (BD FACSVerse; BDBiosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) za účelem stanovení rychlosti pozitivní exprese značené exprese antigenu.

siRNA a transfekce

specifické sekvence siRNA (tabulka I) zaměřené na CD80 a CD86 byly navrženy a vybrány podle metod gu et al (12). Celá siRNA byla zakoupena odshanghaj GenePharma Co., Ltd. (Šanghaj, Čína). Transfectionstep byl proveden podle protokolu výrobce forLipofectamine 2000 (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.).Krátce, DCs byly kultivovány ve 24-tkáňové kultury desky na adensity 1×105 buněk/no na den před transfekci. Připravovat lipidů-siRNA komplexy, 3 µl Lipofectamine 2000 wasincubated v 50 µl Opti-MEM (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.) při pokojové teplotě po dobu 5 minut a 12 µl indikované sirny bylosoučasně v kombinaci s 50 µl Opti-MEM. Zředěný lipofektamin 2000 a siRNA byly následně smíchány a inkubovány po dobu dalších 20 minut při pokojové teplotě pro komplexní tvorbu.Následně komplex byl inkubován s DCs v 24-wellplate při 37°C v 5% zvlhčený CO2 ve vzduchu atmospherefor 6 h. Když cotransfection byla provedena, ekvivalent částky ofCD80 siRNA:Lipofectamine 2000 a CD86 siRNA:Lipofectamine 2000complexes bylo přidáno do každé jamky. FAM-scrambled-siRNA byla použita jakonegativní kontrola za účelem stanovení transfekceúčinnosti. Tři skupiny transfektovaly DCs byly stanoveny: V non-siRNA skupiny, pouze Lipofectamine 2000 bylo přidáno, bez anysiRNA být přidány do DCs. Ve skupině siRNA byly MDC rekotransfektovány siRNA specifickou pro CD80 a CD86. Ve skupině negativesiRNA byly MDC transfektovány nespecifickým necílením fam-siRNA, která nemá homologii s cílenými RNA.Pokusy byly provedeny ve trojím vyhotovení pro každý vzorek.Účinnost transfekce byla stanovena pomocí fluorescencemikroskopie (Nikon Eclipse Ti, Nikon Corporation) a detekována pomocí průtokové cytometrie.

Reverzní transkripce-quantitativepolymerase řetězové reakce (RT-qPCR)

vyhodnotit CD80 a CD86 expresi mRNA levelsfollowing transfekci, RT-qPCR byla provedena. Primerové sekvence (tabulka II) byly navrženy podle GenBank a syntetizovány DaAn Gene co., Ltd. Sun Yat-SenUniversity (Guangzhou, Čína). Při 24 h po transfekci byla celková RNA 1×106 DCs extrahována za použití Trizolového činidla (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) a reverzní přepsal andamplified použití QuantiTect SYBR Green RT-PCR kit (Qiagen GmbH,Hilden, Německo) v Roche LightCycler 480 (Roche Diagnostics,Basel, Švýcarsko). V amplifikace byly prováděny podle výrobce je protokol pro QuantiTect SYBR Green RT-PCRkit (Takala, Japonsko). Amplifikační podmínky byly 40 cyklů 93°C po dobu 3 minut, 93°C po dobu 30 sekund, 55°C po dobu 45 sekund a 72°C po dobu 45 sekund. každý vzorek byl podán do každé ze tří jamek. Relativegene expression levels were calculated using the quantificationcycle (Cq) method with normalization to glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase (GAPDH) as the reference gene using 2−∆∆Cq(13).

průtoková cytometrie

rozpoznat pozitivní výraz sazby CD80 andCD86 na DCs po transfekci, průtoková cytometrie wasperformed na MHC II/CD11c brány pro CD80 a CD86. Šest hodinpo transfekci byly DCs dvakrát promyty PBS a inkubovány s fluorescenčně značenou protilátkou při 4°C po dobu 30 minut.Následně byly buňky opět promyty PBS a fixovány paraformaldehydem 10 g / l. Byly použity následující monoklonální protilátky proti myším: PE-anti-MHC II, FITC-anti-CD11c, PE-anti-CD80 a FITC-anti-CD86, jak je uvedeno výše. Všechny flowcytometrické analýzy byly provedeny pomocí izotypových kontrol IgG.

separace T-buněk

Spleens byly odstraněny poté, co byly myši utraceny cervikální dislokací. T buňky byly odděleny pomocímyši lymfocytů separační médium podle výrobce ‚ sprotocol (Dakewe Biotech Co., Ltd., China). Hustota buněk byla před dalším zpracováním upravena na 1×109 / l.

Smíšené lymfocytární reakce (MLR)

astmatických myší kostní dřeně odvozené DCs(1 x 104/jamku) a zdravé T buněk (1×105 na jamku) byly společně kultivovány in96-desky na 1:10 poměr. Co-kultury byly systémy dělí na tři skupiny: i) non-siRNA skupiny, ii) siRNA skupiny, andiii) negativní siRNA skupiny, s DCs od correspondinggroups, jak je popsáno výše. Dále byla do každé jamky přidána vajíčka na afinální koncentraci 10 mg / l v celkovém objemu 200 µl. Buňky byly inkubovány při 37°C v 5% zvlhčeném CO2 v atmosféře po dobu 72 hodin.

enzymoimunoanalýzy(Elisa)

Po 3 dnech co-kultury, supernatant wascollected. Hladiny IFN-γ a IL-4 byly analyzovány pomocí ELISA kitsspecifické pro IFN-γ a IL-4 (Dakewe Biotech Co ., Ltd.) podle návodu výrobce. Hodnoty Absorbance byly odečteny při 450nm pomocí Multiskan MK3 (Thermo Fisher Scientific, Inc.).

Statistická analýza

statistické analýzy byly provedeny pomocí SPSSsoftware, verze 13.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA). Údaje jsou uvedeny jako průměr ± směrodatná odchylka (SD). Zkoušky bylyprováděné ve třech vyhotoveních pro každou myš. Statistická srovnání mezi skupinami byla provedena pomocí jednosměrné analýzy rozptylu a srovnání v rámci skupiny byla provedena pomocí studentského testu. Rozdíly mezi skupinami byly statisticky považovány za významné, když P<0,05.

výsledky

astmatický model

20 zdravých myší BALB/c stupně SPF bylo přiděleno astmatickým a normálním kontrolním skupinám s 10 myší v každé. Allmice byly vyhodnoceny v konečné analýze bez experimentálníchztráta zvířat. Podle patologie plicní tkáně jsou části plicz myší imunizovaných vajíčky vykazovaly jasný zánět dýchacích cestperibronchiolárními a perivaskulárními infiltráty. Tyto infiltratesconsisted převážně z eozinofilů a lymfocytů, andsections ukázal bronchiální sliznice a hladké svaloviny zahušťování,zvýšená sekrece hlenu, v dýchacích cestách epiteliální buňky zbavují, airwaystenosis, a zánětlivé buňky rozptýlené v lunginterstitium. Nebyly pozorovány žádné významné patologické změnyplicních úseků z normální kontrolní skupiny. Zástupcehistopatologické údaje jsou uvedeny na obr.1.

Buňky povrchu molekuly výraz bymDCs

výraz úrovní CD11c, CD80 a CD86 na themDC povrchů byly zjištěny fluorescence-activated cell sorting(FACS). mDCs od astmatické skupiny vyjádřil CD11c na levelcomparable se, že v normální kontrolní skupina; ne significantdifference byl nalezen mezi oběma skupinami (P>0.05). Nicméně,ve srovnání s normální kontrolní skupinou, astmatické groupshowed výrazně vyšší CD80 a CD86 úrovních exprese(P<0.05; Obr. 2).

transfekce MDC

konstrukce siRNA specifické pro CD80 a CD86 byly úspěšně přeneseny do MDC. Transfekované MDC bylypozorovány pod fluorescenčním mikroskopem 6 h po transfekci.Účinnost transfekce siRNA zjištěná FACS byla ~75% (obr. 3).

mRNA a proteinové exprese CD80and CD86 tím, mDCs po transfekci

mRNA a exprese proteinů úrovně CD80 andCD86 v transfektovaly mDCs byly detekovány pomocí RT-qPCR a FACSanalysis na 24 a 72 h po transfekci. Na CD80and CD86 expresi mRNA hladiny detekovány pomocí RT-qPCR je uvedeno thatCD80 expresi mRNA úrovni v non-siRNA, siRNA a negativesiRNA skupiny byly 2.09±0.46, 0.60±0.17, a 2.04±0.93,respektive, a CD86 expresi mRNA hladiny byly 3.58±0.20,0.91±0.48, a 2.83±0.83, resp. Údaje poskytnuté FACSindicated, že CD80 protein pozitivní výraz sazby v thenon-siRNA, siRNA a negativní siRNA skupiny byly 82.45±15.80,30.79±7.07 a 81.83±10.07%, respektive, a CD86 proteinpositive výraz sazby byly 89.45±10.22, 27.29±6.99, and87.66±11.74%, resp. Úroveň exprese mRNA a míra proteinpozitivní exprese vykazovaly srovnatelné výsledky. Mezi non-siRNA skupinou a thenegativní siRNA skupinou nebyl významný význam (p>0,05). CD80 a CD86 expresi na themRNA a hladin proteinů v siRNA skupiny snížil significantlycompared se, že v non-siRNA a negativní siRNA skupin(P<0.05; Fíky. 4 a 5). To ukazuje, že siRNA-targetedinterference může významně potlačit hladiny mRNA CD80 a CD86 a proteinové exprese.

IFN-γ a IL-4 sekreci T cellsco-kultivovaný s mDCs

Po 72 h ko-kultury, IFN-γ a IL-4 úrovně v supernatantu z mDC a T-buněk co-kultura systém weredetected metodou ELISA. IFN-γ projevu byla významně zvýšena v siRNA skupiny (132.73±25.04 pg/ml) ve srovnání s thenon-siRNA a negativní siRNA skupin (72.56±26.30 a 80.21±24.42 pg/ml, v uvedeném pořadí; P<0.05), zatímco žádné významné differenceswere zjištěny mezi non-siRNA a negativní siRNA skupin(P>0.05). IL-4 výraz hladiny byly významně sníženy v siRNA skupiny (93.04±23.13 pg/ml) ve srovnání s non-siRNAand negativní siRNA skupin (150.69±29.50 a 163.19±25.36 pg/ml,v uvedeném pořadí; P<0.05), zatímco žádné významné rozdíly weredetected mezi non-siRNA a negativní siRNA skupin(P>0.05; Obr. 6).

Diskuse

Bronchiální astma je chronické zánětlivé airwaydisease zahrnující různé zánětlivé buňky, včetně mastcells, eozinofilů, lymfocytů a dalších buněčných komponent (14-17).Nerovnováha Th1 / Th2 je klíčovým faktorem přispívajícím k závažnosti astmatu (18). APC, včetně DCs, makrofágů a B buněk (19), hrají klíčovou roli při stimulaci T buněk (3). Mezi nimi je DC nejsilnějšíapc, přispívající k primární a sekundární imunitní odpovědi, včetně alergické imunity. Zralé DCs (mDCs) s vysokou úrovní ofexpression z ko-stimulační molekuly CD80 a CD86 canactivate T buněk, zatímco nezralé dendritické buňky (idc) s lowlevel exprese CD80 a CD86 potlačení T-buněk responseand navození imunitní tolerance (20,21). Bylo prokázáno, že pacienti s dcsinem s astmatem jsou hyperaktivní (22).

CD80 a CD86 jsou dva druhy bílkovin, které areexpressed na povrchu APC, a které pracují v tandemu, aby provideco-stimulační signály nutné pro T-buněčné aktivace andsurvival. Předchozí studie ukázaly, že exprese úrovně z ko-stimulační molekuly CD80 a CD86 na mDC povrch areclosely spojena s Th2-buněk reakce a zánět dýchacích cest(23,24). U astmatických pacientů, mDCs thathighly express CD80 a CD86 může stimulovat naivní CD4+pomocné T-buňky, aktivace diferencovat směrem k Th2 buněk,což má za následek Th1/Th2 dysbalance. Po tom, inadequatesecretion z Th1 cytokinů, jako jsou IFN-γ, spolu s increasedsecretion Th2 cytokinů, jako jsou IL-4 a IL-5, causeseosinophilic zánět a alergický zánět dýchacích cest(10,24,25). Pro podporu aktivace Th2-buněk(26-28) jsou zapotřebí dvě signalizace. První signál je tvorba ofantigen-MHC komplexů na mDC povrchu, které se vážou specificallywith T-cell receptor-receptor CD3 komplexu na T-buněčné povrchy,a druhý signál je ko-stimulační molekuly výraz afunkční aktivace na mDC povrchy, které se specificky vážou toreceptors na naivní T buňky; dva signály tvoří co-stimulatorypathway (29). Bylo také zjištěno, že existuje třetí signál (30), protože určité buněčné molekuly produkované DCs, jako je thymický stromální lymfopoetin (TSLP), ovlivňují směr diferenciace Th-buněk. Nicméně, mezi všemivýznamené signály, cd80/CD86-CD28 ko-stimulační cestaje nejtradičnější a nejdůležitější. Předchozí výzkum má indicatedthat na CD80/CD86-CD28 ko-stimulační dráha může být effectivetarget pro léčbu astmatu tím, že prokáže, že blokování theCD80/CD86 ko-stimulační dráhy pomocí monoklonální protilátky approachescan inhibovat zánět v astmatických myší (25). Kromě toho potlačení CD80 / Cd86ko-stimulační dráhy pomocí antisense oligonukleotidů můžepotlačit hyperaktivitu dýchacích cest (31).

RNAi je fenomén umlčování genů, kdebyendogenní – nebo exogenní-specifické dvouvláknové RNA spouštějí degradaci homologní mRNA a vyvolávají ztrátu odpovídajícíchfunkčních fenotypů. Protože tato technika byla poprvé objevena v roce 1998 Ohněm et al (32), thetechnique prošla další rozvoj k dosažení vysoká míra specifičnosti a efektivity. Terapeutická aplikace Rnaitechnologie je téma, které v posledních letech přitahuje vysokou úroveňzájem o základní lékařský a klinický výzkum.Schopnost RNAi inhibovat virulentní genovou expresi bylaširoce používaný k léčbě různých onemocnění (33-35).Také řada studií uvádí, že RNAi lze použít inDCs k diagnostice a léčbě bronchiálního astmatu (36-39).Darcan-Nicolaisen et al (40)zjistili, že dva hlavní příznaky alergické astma v theOVA indukované astma myší model, který je zánět dýchacích cest andhyperactivity, byly výrazně zmírněny tím, že signál transducerand aktivátor transkripce 6 (STAT6) tlumení hluku v airwayepithelial buněk pomocí podání siRNA nosní kapky.Moriwakim et al (41)ukázala, že siRNA-zprostředkované potlačení cytokinové signalizace 3(SOCS3) umlčování genů by mohla potlačit reaktivity dýchacích cest andeosinophilic infiltrace, která byla vyvolána tím, že allergenicstimulation u astmatických myší. Zheng et al (42) zjistili, že použití siRNA wasable k inhibici tyrozin protein kináz (TPK) genové exprese v DCs astmatických myší, potlačovat funkční schopnosti ofDCs jako antigen-prezentující buňky, a tím inhibuje T-cellactivation a diferenciace. Studie týkající se účinků siRNA zprostředkovaného knockdownu CD80 a CD86 v DCs na diferenciaci T-buněk u astmatických myší však chybí. V současné studii byla cd80 a CD86 mRNA a exprese proteinů v DCs odvozených od myší kosti úspěšně snížena pomocí siRNA zaměřené na CD80 a cd86, což ověřilo účinnost RNAi.

v této studii byl použit astmatický myší model, který byl stanoven podle dříve hlášených metod (43). Výsledky ukázaly, že MDC získané z astmatické skupiny vykazovaly zvýšené hladiny exprese Cd80 a CD86, což znamená, že kapacita CD80/Cd86 může být u astmatických pacientů zvýšena. Followingtransfection z mDCs s CD80 a CD86-siRNA cílené, themRNA úrovních exprese a protein pozitivní výraz sazby ofCD80 a CD86 byly výrazně snížil, což potvrzuje, theinhibitory smyslu, že siRNA přístup měl na co-stimulatorymolecules CD80 a CD86 na transkripční a translationallevels. V supernatantu z co-kultury mDCs a T buněk,RNAi indukované zvýšení IFN-γ projevu a snížení r-4 úrovně, což naznačuje, že snížení exprese spolufinancování-stimulační molekuly CD80 a CD86 v mDCs oslabené theCD80/CD86-CD28 ko-stimulační dráhy u astmatických myší. RNAi také ovlivnila expresi th1 / Th2 cytokinů, což naznačuje, že původní nerovnováha Th1/Th2 byla změněna a následně byla indukována imunetolerance. Tato zjištění naznačují, že CD80 a Cd86může být potenciálním cílem pro aplikaci RNAi při léčbě astmatu a poskytuje novou cestu pro genovou terapii astmatu.

Poděkování

Tato studie byla podpořena Projekty Grantsfrom Státní Key Laboratoř Respiračních Onemocnění (Guangzhou,Čína) (grant no. 2007DA80154F1107).

	Locksley RM: Astma a allergicinflammation. Buňka. 140:777–783. 2010. Zobrazit Článek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Holgate ST: Vrozené a adaptivní immuneresponses v astma. Nat Med. 18:673–683. 2012. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Larché M, Robinson DS a Kay AB: roleof T lymfocytů v patogenezi astmatu. J.Klinimunol. 111:450–464. 2003. Zobrazit Článek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lambrechtovi BN a Hammad H: úloha ofdendritic a epiteliální buňky jako hlavní regulátory allergicairway zánět. Lanceta. 376:835–843. 2010. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Holt PG a Uphama JW: role ofdendritic buňky při astmatu. Curr Opin Alergie Clin Immunol. 4:39–44.2004. Zobrazit Článek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lim TS, Goh JK, Mortellaro, Lim CT,Hämmerling GJ a Ricciardi-Castagnoli P: CD80 a CD86differentially regulovat mechanické interakce T-buněk withantigen-prezentující dendritické buňky a B-buňky. PLoS Jedna.7:. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Wong CK, Lun SW, Ko, FW, Ip WK, Hui DS andLam CW: Zvýšená exprese plazmatických a buněčných povrchůekostimulační molekuly CTLA-4, CD28 a CD86 u dospělých pacientůs alergickým astmatem. Klinický Exp Imunol. 141:122–129. 2005.Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Shi HZ, Xie ZF, Deng JM, Chen YQ a XiaoCQ: Rozpustný protein CD86 ve vzorcích séra pacientů s astmatem.Hrudník. 59:870–875. 2004. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Van Rijt LS a Lambrechtovi BN: Dendritickébuňky u astmatu: funkce mimo senzibilizaci. Klinická Alergie.35:1125–34. 2005. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Van Rijt LS, Vos, N, Willart M, Kleinjan,Coyle AJ, Hoogsteden HC a Lambrechtovi BN: Zásadní roli ofdendritic mobilní CD80/CD86 costimulation v indukci, ale notreactivation, na efektorové TH2 odpovědi v myším modelu astmatu.J. 114:166–173. 2004. Zobrazit Článek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Wu SG, Wang GL, Li, LY a Ji J: Účinky ofmicroRNA-21 na interleukin 12/signál snímače a activatorof transkripce 4 signální dráhy u astmatických myší. Cent Eur JImmunol. 39:40–45. 2014. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Gu X, Xiang J, Yao Y a Chen Z: Effectsof RNA interference na CD80 a CD86 expresi v bonemarrow odvozených z myších dendritických buněk. Skandinávie. 64:588–594.2006. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Livak KJ a Schmittgen TD: Analýza ofrelative dat genové exprese pomocí kvantitativní PCR v reálném čase a 2−∆∆Ct metodou. Metod. 25:402–408. 2001. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Fanta CH: Astma. N Engl J Med.360:1002–1014. 2009. Zobrazit Článek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lambrechtovi BN a Hammad H: Plicní dendriticcells v respirační virové infekce a astma: Od ochrany toimmunopathology. Annu Rev Immunol. 30:243–270. 2012. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Wenzel SE: Astma fenotypy: Theevolution z klinické molekulární přístupy. Nat Med.18:716–725. 2012. Přezkoumáníčlánek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Jeníček TT, Johnston SL a Openshaw PJ:Mikroby a slizniční imunitní odpovědi u astmatu. Lanceta.381:861–873. 2013. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Compalati E, Braido F a Canonica GW: Anupdate na alergenové imunoterapie a astma. Curr Opin Pulm Med.20:109–117. 2014. Zobrazit Článek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Goyvaerts C, Dingemans J, De Groeve K,Heirman C, Van Gulck E, Vanham G, De Baetselier P, Thielemanse K,Raes G a Breckpot K: Zaměření se na lidský antigen-prezentující cellsubsets. J Virol. 87:11304–11308. 2013. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Reise Sousa C: Dendritické buňky v matureage. Nat Rev Immunol. 6:476–483. 2006. Přezkoumáníčlánek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Gill MA: role dendritických buněk inasthma. J. 129:889–901. 2012. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Shi JH, LI YG a LI TS: role ofdendritic buňky antigen prezentace a patogeneze ofasthma. Zhonghua Jie He Hu Hu Xi Za Zhi. 28:22–27. 2005.(InChinese). PubMed/NCBI
	Wong CK, Lun SW, Ko, FW, Ip WK, Hui DS andLam CW: Zvýšená exprese plazmy a buněk surfaceco-stimulační molekuly CTLA-4, CD28 a CD86 u dospělých patientswith alergické astma. Klinický Exp Imunol. 141:122–129. 2005.Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Bellou a Finn PW: Costimulation:Kritické cesty v imunologické nařízení astmatu. CurrAllergy Astma Rep. 5: 149-154. 2005. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Chen YQ a Shi HZ: CD28/CTLA-4-CD80/CD86and SUROVINY-B7RP-1 kostimulační dráhu v bronchiální astma. Alergik.61:15–26. 2006. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Bieber T, Novak N, Herrmann N a Koch S:Role dendritických buněk v atopické dermatitidy: aktualizaci. Clin RevAllergy Immunol. 41:254–258. 2011. Zobrazit Článek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Hespel C a Moser M: Úloha inflammatorydendritic buněk přirozené a adaptivní imunity. Eur J Immunol.42:2535–2543. 2012. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Novak N: aktualizace na roli humandendritic buněk u pacientů s atopickou dermatitidou. J.Klinimunol. 129:879–886. 2012. Zobrazit Článek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lombardi V, Singh AK a Akbari O: Úlohu kostimulační molekuly v alergických onemocnění a astmatu. IntArch Alergie Immunol. 151:179–189. 2010. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Zhang Y, Zhou X a Zhou B: DC-derivedTSLP podporuje Th2 polarizace v LPS-základním nátěrem alergické airwayinflammation. Eur J Immunol. 42:1735–1743. 2012. Zobrazit Článek: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Crosby JR., Guha M, Tung D, Miller DA,Bender B, Condon TP, York-DeFalco C, Geary RS, Monia BP, Karras JGand Gregory SA: Vdechnutí CD86 antisense oligonukleotid suppressespulmonary zánět a dýchacích cest hyper-vnímavost v allergicmice. Jaromír Jágr. 321:938–946. 2007. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	střílet, Xu Y, Montgomery MK, Kostas SA,Řidič SE a Mello CC: Silná a specifická genetická interferencedvouřetězcová RNA v Caenorhabditis elegans. Povaha.391:806–811. 1998. ViewArticle : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Ghafouri-Fard S: siRNA a cancerimmunotherapy. Imunoterapie. 4:907–917. 2012. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Gavrilov K a Saltzman WM: TherapeuticsiRNA: Principy, výzvy a strategie. Yale J Biol Med.85:187–200. 2012.PubMed/NCBI
	Yan WJ, Xu SJ, Xie MM a Wu BL: Effectsof exogenní cyklický dimerní guanosinemonophosphate na geneexpression Streptococcus mutans. Zhongguo Zu Zhi GongCheng Yan Jiu. 16:1451–1454. 2012.(V Čínštině).
	značka Lee CC, Huang HY a Chiang BL:Lentiviral-zprostředkované interleukin-4 a interleukin-13 RNAinterference snížení zánětu dýchacích cest a bronchů.Hum Gene Ther. 22:577–686. 2011. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Li Y, Slunce, M, Cheng H, Li S, Liu L, Qiao H,Hua Y a Lu J: tlumení hluku IL-23 výraz malým vlásenky RNAprotects proti astmatu u myší. Exp Mol Med. 43:197–204. 2011.Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Woska JJ a Gillespie MĚ:Malé interferující RNA zprostředkované identifikace a regulace theternary SNARE komplexu, zprostředkování RBL-2H3 degranulaci žírných buněk.Skandinávie. 73:8–17. 2011. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lu XX, McCoy KS, Xu JL, Hu WK a Chen HB:Malé interferující RNA cílení T-cell Ig mucin-3 decreasesallergic dýchacích cest, zánětu a hyperreaktivity. Zánět.36:582–591. 2013. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Darcan-Nicolaisen Y, Meinicke H, Fels G,Hegend O, Haberland, Kühl, Loddenkemper C, Witzenrath M, Kubeš, Henke W a E Hamelmann: Malá interferující RNA protranskripční faktor STAT6 inhibuje alergický zánět dýchacích cesta hyperreaktivita u myší. J. 182:7501–7508. 2009.Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Moriwakim, Inoue H, Nakano T, MatsunagaY, Macuno Y, Matsumoto T, Fukuyama S, Kan-O K, Matsumoto K., Tsuda-Eguchi M, et al: T buňky zacházení s malé interferující RNAfor tlumič z cytokinové signalizace 3 moduluje alergické airwayresponses v myším modelu astmatu. Am J Respir Cell Mol Biol.44:448–455. 2011. Zobrazit Článek : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Zheng YH, Lu JJ, Guo ZL, Ren T a LiangYJ: Malé interferující Rna specifické pro slezinu tyrosin kinaseinhibit zrání dendritických buňkách astmatických myší in vitro.Zhongguo Hu Xi Yu Wei Zhong Jian Hu Za Zhi. 8:487–491. 2009.(InChinese).
	Li JG, Zhuansun YX, Běžel PX, Zhang W, MoXN, Wu H a Li YQ: Účinky mezenchymálních kmenových buněk kostní dřeněna CD4+CD25+ regulačních T buňkách a zánět dýchacích cest u astmatických myší. Zhongguo Zu Zhi Gong Cheng Yan Jiu.12:9302–9305. 2008.(V Čínštině).