Experimentální
Označení RuBisCo:
Aedans(454): dárce F(58): akceptor
Studie Vázání:
Termíny:
ADP bullet: komplex GroEL povinen GroES a ADP
ApoGroEL: Jen GroEL comlex (používá se v předchozí závazné studie RuBisCo substrátu)
Lin et al. stanoveno, že:
1. Při vazbě substrátu na trans kroužek ADP bullet vs. apoGroEL ring byl rozdíl v pražci.
– to bylo patrné kalením donorové fluorescence (B.)
– to naznačovalo rozdíl v konformaci proteinového substrátu.
 |
 |
2. Bylo zjištěno „pasivní“ rozvinutí substrátových proteinů vázaných na apogroelový kruh.
– Toto rozvinutí však probíhalo mnohem pomaleji než Groelův funkční reakční cyklus.
3. Dochází k méně „pasivnímu“ rozkládání substrátu vázaného na ADP kuličkový trans-kroužek.
– potvrdila to studie trávení proteázy.
– Jedná se však o fyziologicky relevantnější komplex.
– takže je to maximálně efektivní úroveň, nebo pouze první krok v reakčním cyklu?
testování fyziologický význam, oni přidali ATP na ADP Kulka Reakce, a sledovat STARAT
 |
Po přidání ATP, našli: – počáteční rychlé, nucené konformaci rozšíření substrátu – a pak pomalejší zhutnění fáze – Patrné na Obrázku b |
 |
 |
-Obrázek c ukazuje, že kinetiku zhutnění fáze isdependent na GroES koncentrace, což znamená, že je závislé na
thesequestration mechanismus složitý.
– zatímco fáze expanze je nezávislá na koncentraci GroES.
k Závěru, existují dvě fáze Rozkládání:
– Pomalé pasivní rozvíjející se vzhledem k substrátu vázat na trans prsten GroEL Komory(od první závazné experiment)
– Rapid, ATP řízený rozvíjející se v důsledku konformačních změn GroEL komory.
Rychlé rozvinutí není závislé na GroES:
– přebytek varianty GroEL s jedním kroužkem, SR1 byl použit jako past GroES.
– SR1 je schopen vázat substrát a katalyzovat rozvinutí reakce,ale je schopen vázat a vázat GroES určit závislost z reakce na uhlíku substrátu.
– určuje, že rychlý rozvíjející monitered podle FRET occuredwithout the GroES cap současné době, a následné zhutnění fáze didnot.
– to znamená, že fáze rychlé expanze je závislá na konformační změně Groelu vyvolané vazbou ATP.
.. je rozložení substrátu nezbytné pro produktivní skládání?
– Je to zásadní krok a důležitý pro skládací mechanismus GroEL/GroES?
– zjistili, že zlomek nepůvodního Rubiska, který se objevuje vpůvodní stav je úměrný rozsahu rozvíjení.
– Chcete-li prozkoumat toto , oni chtěli měřit pomalý, pasivní rozkládání substrátu vzhledem k GroEL závazné sám(ne ATP
závislé)
– Jsou znovu využity SR1 vazba na substrát, tentokrát ne jako atrap, ale jako pasivní-rozvíjející se vazebné místo pro substrát.
– Doba inkubace se SR1 je korelována s množstvím rozvinutí, protože rozvinutí je způsobeno pouze vazbou substrátu.
– zjistili, že existuje korelace mezi množstvím rozkládajícího se na nativní protein.
– takže nucené rozvinutí GroEL / GroES je účinným způsobem, jak podpořit mechanismus rozkládání
potřebný pro správné skládání bílkovin.
 |
 |
 |
 |