Indukovatelných klindamycin rezistence u stafylokoků může být detekována pomocí diskové difúzní metody využívající Klindamycin a Erythromycin disky. D test se provádí pomocí diskové difúzní, umístění 15 µg Erytromycin disku v blízkosti 2 µg Klindamycin disku na agarovou desku, která byla naočkována s stafylokokové izolovat; deska se pak inkubuje přes noc.
zploštění inhibiční zónu kolem Klindamycinu disku proximální k Erytromycinu disk (produkující zóna inhibice ve tvaru písmene D) je považován za pozitivní výsledek a ukazuje, že Erythromycin má indukované Klindamycin odpor (pozitivní „D-zone test“). U izolátů rezistentních na Erythromycin mohou indukční testy pomoci laboratořím určit, zda mají být výsledky klindamycinu hlášeny jako citlivé (pokud je indukční test negativní) nebo jako rezistentní (pokud je indukční test pozitivní).
Mechanismus účinku Erythromycinu a Clindamycinu a Vývoje Rezistence,
Erytromycin (makrolidové) a klindamycin (lincosamide) představují dvě odlišné třídy antimikrobiálních látek, které inhibují syntézu proteinů vazbou na 50S ribozomální podjednotky bakteriálních buněk. U stafylokoků může dojít k rezistenci na obě tato antimikrobiální činidla methylací jejich ribozomálního cílového místa. Taková rezistence je obvykle zprostředkována geny erm.
Klinický význam Indukovatelných Klindamycin odpor:
Makrolidová-lincosamide-streptogramin B (MLSB) odpor, který je zprostředkován cíl modifikace mechanismu, výsledky v rezistenci k Erytromycinu, Klindamycinu, a streptogramin B. Tento mechanismus může být
- Konstitutivní, kde rRNA methylase se vždy vyrábí,
Pokud se testování In vitro se provádí Staphylococcus aureus izolátů s konstitutivní rezistence jsou rezistentní k Erytromycinu a Klindamycinu. - Nebo může být získaná, kde methylase se vyrábí pouze v přítomnosti vyvolávající agent (Poznámka: Erythromycin je účinný induktor Makrolidová-lincosamide-streptogramin B (MLSB) rezistence). Izoláty s indukovatelnou rezistencí jsou rezistentní na Erythromycin, ale při rutinním testování invitro se zdají být citlivé na klindamycin.
Klinický význam Indukovatelných Klindamycin testování rezistence (D Test)
Klindamycin je atraktivní prostředek pro empirické terapie pro podezření na S. aureus, protože jeho vynikající farmakokinetické a farmakodynamické vlastnosti. Klinická selhání léčby klindamycinem při léčbě infekcí MRSA byla dokumentována u kmenů, které byly citlivé na klindamycin, ale rezistentní na erytromycin. Poruchy byly způsobeny indukovatelnou rezistencí na klindamycin.
v takových případech může být léčba klindamycinem in vivo zvolena pro konstitutivní mutanty erm, což může vést ke klinickému selhání. Rezistence na klindamycin může být konstitutivní nebo indukovatelná. Rutinní testy citlivosti na antibiotika nemohou tyto kmeny identifikovat. K detekci indukované rezistence na klindamycin se používá test D (inducible clindamycin resistance).
postup pro indukovatelný test rezistence na klindamycin (D):
- připravte 0.5 McFarland standardní pozastavení Erythromycin rezistentní Staphylococcus aureus izolátů
- Vytvořit trávník kultury bakterií v Muller Hinton Agar (MHA) desky.
- dejte klindamycin (2 µg ) a Erythromycin (15 µg ) disky přibližně 15 mm od sebe (měřeno od okraje k okraji).
- Inkubujte destičku po dobu 16 až 18 hodin při 37oC
Interpretace výsledku D Testu
jasné, D-tvaru zóna inhibice kolem Klindamycinu disk je označen jako D fenotyp, který je označen jako D nebo D+. Ve výsledcích diskové difúze jsou také pozorovány čtyři další neindukční fenotypy (označené jako negativní , mlhavé d zóny , rezistentní a citlivé)