přehled: touto metodou vytvoříme čistou a kontaminující injekční stříkačku. Stříkačka se naplní zahřátou a sterilizovanou vodou a nechá se vychladnout. Spory budou poté přeneseny z tisku spór do roztoku stříkačky pomocí vyčištěného a dezinfikovaného brokového skla. Po dokončení tohoto Tek jste vytvořili stříkačku s roztokem spór připravenou k použití v jakékoli mikroskopické aplikaci.
Poznámka: Tyto pokyny jsou nejúčinnější, pokud jsou prováděny v nejvíce sterilním prostředí, které je k dispozici. Výhodná metoda zahrnuje následující kroky při práci v čisté a sterilní odkládací schránce nebo před laminárním průtokem. Pokud si nepřejete postavit odkládací schránku nebo ji nemáte, byly s úspěchem provedeny následující kroky prací na důkladně očištěné a dezinfikované desce. Pro čištění a dezinfekci pracovního prostoru se doporučuje liberální použití dezinfekčního prostředku ve spreji a zředěného bělícího roztoku.
potřebné materiály:
Prázdné sterilní injekční stříkačky
Dvě litr (nebo větší) hrnec
Jedna láhev 91% isopropylalkohol
Několik papírové ručníky
zapalovač nebo alkohol plamen
sklenice
Sterilní spore print
Postup: sterilní injekční stříkačku
1. Naplňte nádobu na vaření do poloviny kohoutkem nebo destilovanou vodou(pokud voda z vodovodu obsahuje vyšší množství minerálů a chemikálií, použijte destilovanou vodu).
2. Vařte vodu v hrnci po dobu minimálně deseti minut, mělo by to být dostatečné pro sterilizaci a čištění vody od všech bakterií, virů a spór plísní.
3. Vezměte prázdnou stříkačku a naplňte ji vroucí vodou. Nechte ji sedět dvě minuty s horkou vodou uvnitř. (Pokud byla injekční stříkačka sterilní, přeskočte kroky 4 a 5).
4. Vyčistěte horkou vodu ze stříkačky do dřezu, ne zpět do hrnce.
5. Opakujte kroky 3 a 4 ještě dvakrát. Po druhé nechte horkou vodu v injekční stříkačce.
6. Umístěte stříkačku na chladné místo bez průvanu, nejlépe do čistého sáčku se zipem
7. Nechte ji několik hodin vychladnout, než přistoupíte k postupu dva.
postup dva: Přenos výtrusů do stříkačky
1. Nejprve vyčistěte pracovní plochu. To může zahrnovat setření všech pracovních ploch zředěným bělícím roztokem a liberálně postřik oblasti dezinfekčním prostředkem, jako je Lysol.
2. Umístěte následující materiály v palubní desce nebo na očištěný a sanatized pracovní povrch: sklenice, vaše chlazený injekční stříkačky, láhve alkoholu, papírový ručník, tisku (stále v zip-lock sáčku) a lehčí nebo alkohol plamen.
3. Před dalším pokračováním si umyjte ruce antibakteriálním mýdlem.
4. Přeložte papírový ručník do ¼ sekcí a namočte jeho roh alkoholem.
5. Alkoholem namočeným ručníkem otřete vnitřek brokového skla a v podstatě sterilizujte povrch, který se chystáte použít při přenosu. Nechte stříkané sklo uschnout na vzduchu, mělo by to trvat jen několik sekund.
6. Odstraňte kryt jehly ze sterilní stříkačky a jehlu sterilizujte plamenem. Pak si vezměte papírový ručník namočený alkoholem a otřete jehlu, abyste dále pomohli při sterilizaci. Snažte se, aby se jehla nedotkla jakéhokoli jiného povrchu, pokud k tomu není instruováno jinak.
7.Poznámka: v tomto okamžiku je důležité pracovat co nejrychleji, aby se zabránilo možnostem kontaminace plísní a bakterií spadajících do vašeho pracovního prostoru a tím zničení stříkačky.
8. Odstraňte tisk z úložného sáčku. Rozložte ji, abyste odhalili spory. Lehce začněte škrábat pomocí jehly stříkačky část tisku do sklenice. U středně velkého tisku je obvykle dostačující seškrábnout část, která není větší než 1/5 celkového tisku.
9. V brokovnici budete mít malou znatelnou sbírku spór. Nyní odstraňte více než polovinu vody ze stříkačky do sklenice a lehce promíchejte spory do roztoku.
10. Nasajte roztok sporové vody do stříkačky. Možná budete muset vyčistit trochu vody do sklenice a znovu nasát, abyste pomohli zachytit všechny spory do stříkačky.
11. Jakmile budete mít spore roztok zpět do stříkačky měli byste si všimnout, že voda uvnitř se stala lehce tónovaná, a můžete vidět malé shluky spór plovoucí v roztoku. To je dobré, dokončili jste proces.
12. Jehlu znovu sterilizujte papírovou utěrkou namočenou v alkoholu, vyměňte kryt jehly a vložte stříkačku zpět do čistého sáčku se zipem.
13. Před použitím v mikroskopické aplikaci nebo inokulací pro jedlé odrůdy nechte stříkačku sedět nejméně 12 hodin. Čím starší je použitý tisk, tím více se „dehydratují“ spory. Pro správné mikroskopické pozorování nebo klíčení bude nutné spory nechat rehydratovat.