Aktivace phosphorylase kinázy vyžaduje fosforylaci β-podjednotku tím, že proteinkinázy a vazba Ca2+ k δ-podjednotky.
enzym je regulován dvěma procesy: reverzibilní fosforylací a alosterickou regulací.
v prvním případě hraje rozhodující roli protein kináza A (PKA). To přenáší fosfátovou skupinu na β-podjednotku původně slabě aktivní fosforylázové kinázy. V důsledku toho se zvyšuje úroveň aktivity kinázy. Samotná PKA je aktivována z neaktivní formy druhým poslem, táborem. Jedním z důvodů uvolnění cAMP je přítomnost hormonů, jako je adrenalin a glukagon.
fosforylázová kináza však může být také aktivována do částečně aktivní formy zvýšenou hladinou Ca2+. Kalciový senzor je kalmodulin, který odpovídá podjednotce δ enzymu.
Pokud je jak β – podjednotka fosforylázové kinázy přítomna ve fosforylované formě a kalmodulin má vázané ionty vápníku v δ-podjednotce, je enzym plně aktivní.