Plné paperStructure a funkce zona pellucida: Identifikace a charakterizace proteinů myši oocytů'y zona pellucida☆

zona pellucida je acelulární vrstva, která obklopuje plazmatickou membránu plně dospělý savčích oocytů a které plní řadu důležitých funkcí během oogeneze, oplození, a preimplantační vývoj. V tomto šetření proteinů myši oocyt je zona pellucida byly identifikovány a charakterizovány pomocí zonae pellucidae individuálně izolované od plně dospělý oocytů s ústa-provozuje micropipets. Různé morfologické a biochemické kritéria byly použity k hodnocení čistoty izolované zonae pellucidae a, ve většině případů, bylo zjištěno, že být prakticky bez kontaminace jinými oocytů proteiny. Bylo zjištěno, že každá zona pellucida obsahuje 4.8 ng proteinu, což představuje 80% nebo více suché hmotnosti zona pellucida a asi 17% celkového proteinu oocytů. Elektroforetické analýzy jak nemnoho jak pět izolovaných zonae pellucidae léčeni diazotuje iodosulfanilic kyseliny odhalil přítomnost pouze tři značeného proteiny, určené ZP1, ZP2 a ZP3. Stejné tři proteiny byly identifikovány pomocí Coomassie blue barvení, když velké množství izolovaných zonae pellucidae (cca 750) byly podrobeny SDS-polyakrylamidové gelové elektroforézy. Tyto tři proteiny migrovat jako široké pruhy na SDS-polyakrylamidové gely, v souladu s jejich glykoproteiny, s zjevné molekulové hmotnosti 200,000 (ZP1), 120,000 (ZP2), a 83,000 (ZP3). Stejné proteiny byly značeného při neporušené oocyty byly ošetřeny s diazotuje iodosulfanilic kyseliny, činidla, které není proniknout do oocytu je plazmatická membrána, nebo když izolované zonae pellucidae byli léčeni s 3H-s označením 1-dimethylaminonaphthalene-5-sulfonyl chlorid. Výsledky analýzy aminokyselin a dvojrozměrné elektroforézy jednotlivých proteinů s vysokým rozlišením naznačují, že každý protein představuje jedinečný polypeptidový řetězec. Proteiny ZP1, ZP2 a ZP3 představují asi 36, 47 a 17% celkového proteinu zona pellucida. V přítomnosti redukčních činidel, které způsobují rozpuštění zona pellucida, ZP1 je převeden do druhů, který migruje s zjevné molekulové hmotnosti 130 000, což naznačuje, že to existuje jako oligomer, stabilizovaný pomocí disulfidové vazby, v nesnížené státu. Výsledky těchto experimentů jsou popsány z hlediska vlastnosti zona pellucida před a po oplodnění a jsou porovnány s výsledky získanými pomocí žloutkovým obálky vajec z nonmammalian druhů zvířat.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.