David A Weitz'S Lab

solujen erittämien molekyylien, esimerkiksi sytokiinien, kvantifiointi on olennaista immuunivasteiden luonnehtimiselle. Sytokiinikaappausmenetelmiä, joissa käytetään vasta-aineita erittämien molekyylien ankkuroimiseksi erittäviin soluihin, käytetään laajalti immuunivasteiden luonnehtimiseen, koska ne mahdollistavat elinkelpoisten vastesolujen herkän tunnistamisen ja elpymisen. Kuitenkin, jos sytokiinit diffuusi pois erittävät solut, ei-erittävät solut tunnistetaan myös vastaavia soluja. Täällä kapseloimme immuunisoluja mikrofluidipisaroihin ja suoritamme pisaroiden sisällä sytokiinikaappauskokeita, joilla rajoitetaan eritettyjen sytokiinien diffuusiota. Käytämme mikrofluidisia laitteita kapseloidaksemme nopeasti yhden luonnollisen tappajan NK-92 MI-solut ja niiden kohde K562-solut mikrofluidipisaroiksi. Suoritamme in-droplet IFN-γ-sieppaus määrityksiä ja osoitamme, että NK-92 MI-solut tunnistavat kohdesolut pisaroissa ja aktivoituvat erittämään IFN-γ: ta. Pisaran kapselointi estää eritettyjen tuotteiden diffuusion naapurisoluihin ja vähentää dramaattisesti sekä vääriä positiivisia että vääriä negatiivisia suhteessa ilman pisaroita suoritettuihin määrityksiin. Näytteessä, jossa on 1% tosi positiivisia, kapselointi vähentää 94%: sta 2%: iin negatiivisina esiintyvien tosi positiivisten solujen määrää; näytteessä, jossa on 50% tosi positiivisia, positiivisina esiintyvien stimuloimattomien solujen määrä vähenee 98%: sta 1%: iin. Kun solut on vapautettu pisaroista, eritetty sytokiini jää kiinni erittäviin immuunisoluihin, mikä mahdollistaa voimakkaasti rikastuneiden populaatioiden eristämisen aktivoituneita efektoriimmuniteettisoluja varten. Pisaroiden kapselointia voidaan käyttää taustavoiman vähentämiseen ja yksisoluisten eritystestien havaitsemisen parantamiseen.

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.