fosforylaasikinaasin aktivoituminen vaatii β-alayksikön fosforyloinnin proteiinikinaasi A: n avulla ja Ca2+: n sitoutumisen δ-alayksikköön.
entsyymiä säätelee kaksi prosessia: reversiibeli fosforylaatio ja allosteerinen säätely.
edellisessä proteiinikinaasi A: lla (PKA) on ratkaiseva rooli. Tämä siirtää fosfaattiryhmän aluksi heikosti aktiivisen fosforylaasikinaasin β-alayksikköön. Tämän seurauksena kinaasin aktiivisuustaso nousee. Itse PKA aktivoituu passiivisesta muodosta toisen viestinviejän, Campin, toimesta. Yksi syy leirin vapautumiseen on hormonien, kuten adrenaliinin ja glukagonin, läsnäolo.
fosforylaasikinaasi voi kuitenkin aktivoitua myös osittain aktiiviseen muotoon kohonneen Ca2+ – tason myötä. Kalsiumanturi on kalmoduliini, joka vastaa entsyymin δ-alayksikköä.
Jos sekä fosforylaasikinaasin β-alayksikkö esiintyy fosforyloituneessa muodossa ja kalmoduliini on sitoutunut kalsiumioneihin δ-alayksikössä, entsyymi on täysin aktiivinen.