Hyperkromisuus

DNA: n Lämpödenaturaatio, jota kutsutaan myös sulamiseksi, saa kaksoiskierteen rakenteen purkautumaan yksijuosteiseksi DNA: ksi. Kun liuoksessa olevaa DNA: ta kuumennetaan yli sen sulamislämpötilan (yleensä yli 80 °C), kaksijuosteinen DNA purkautuu yksijuosteiseksi DNA: ksi. Emäkset irtoavat ja voivat siten absorboida enemmän valoa. Synnyinmaassaan DNA: n emäkset absorboivat valoa 260 nm: n aallonpituusalueella. Kun emäkset purkautuvat, suurimman absorbanssin aallonpituus ei muutu, mutta absorboitunut määrä kasvaa 37%. Kaksijuosteinen DNA-juoste, joka hajoaa kahdeksi yksijuosteiseksi, saa aikaan jyrkän yhteistoiminnallisen siirtymän.

Hyperkromisuuden avulla voidaan seurata DNA: n tilaa lämpötilamuutoksina. Siirtymä – / sulamislämpötila (Tm) on lämpötila, jossa UV-valon absorbanssi on 50% maksimin ja minimin välillä eli jossa 50% DNA: sta on denaturoitu. Monovalentin kationipitoisuuden kymmenkertaistuminen nostaa lämpötilaa 16, 6 °c: lla.

hyperkromaattinen vaikutus on DNA: n absorbanssin silmiinpistävä lisääntyminen denaturaation yhteydessä. DNA: n kaksi juostetta sitoutuvat toisiinsa pääasiassa komplementaaristen emästen välisillä pinoamisvuorovaikutuksilla, vetysidoksilla ja hydrofobisella vaikutuksella. Vetysidos rajoittaa aromaattisen renkaan resonanssia, joten myös näytteen absorbanssi on rajallinen. Kun DNA: n kaksoiskierrettä käsitellään denaturoiduilla aineilla, kaksoiskierrerakennetta pitävä vuorovaikutusvoima häiriintyy. Tämän jälkeen kaksoiskierre jakautuu kahdeksi yksittäiseksi säikeeksi, jotka ovat satunnaisessa kietoutuneessa konformaatiossa. Tällöin emäs-emäs-vuorovaikutus vähenee, mikä lisää DNA-liuoksen UV-absorbanssia, koska monet emäkset ovat vapaassa muodossa eivätkä muodosta vetysidoksia komplementaaristen emästen kanssa. Tämän seurauksena yksijuosteisen DNA: n absorbanssi on 37% suurempi kuin kaksijuosteisen DNA: n absorbanssi samassa pitoisuudessa.

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.