indusoituva klindamysiiniresistenssi stafylokokkeihin voi olla havaittu Levydiffuusiomenetelmällä käyttäen klindamysiini-ja Erytromysiinilevyjä. D testi tehdään levydiffuusiolla, jolloin 15 µg: n Erytromysiinilevy asetetaan 2 µg: n Klindamysiinilevyn läheisyyteen agar-levylle, johon on inokuloitu stafylokokki-isolaatti; tämän jälkeen levy haudotaan yön yli.
inhibitioalueen litistyminen klindamysiinilevyn ympärillä proksimaalisen erytromysiinilevyä (joka tuottaa D-kirjaimen muotoisen estovyöhykkeen) pidetään positiivisena tuloksena ja osoittaa, että erytromysiini on indusoinut klindamysiiniresistenssiä (positiivinen ”d-vyöhyketesti”). Erytromysiinille resistenttien isolaattien induktiotestit voivat auttaa laboratorioita määrittämään, onko klindamysiinin tulokset ilmoitettava herkiksi (kun induktiotesti on negatiivinen) vai resistenteiksi (kun induktiotesti on positiivinen).
erytromysiinin ja klindamysiinin vaikutusmekanismi ja resistenssin kehittyminen
erytromysiini (makrolidi) ja klindamysiini (linkosamidi) edustavat kahta eri luokkaa mikrobilääkkeitä, jotka estävät proteiinisynteesiä sitoutumalla bakteerisolujen 50s ribosomaaliseen alayksikköön. Stafylokokit voivat aiheuttaa resistenssiä molemmille mikrobilääkkeille ribosomaalisen kohdekohdan metylaation kautta. Tällainen resistenssi välittyy tyypillisesti erm-geenien välityksellä.
Indusoituvan Klindamysiiniresistenssin kliininen merkitys:
kohdepuolen modifikaatiomekanismin välittämä makrolidi-linkosamidi-streptogramin B (MLSB) – resistenssi johtaa resistenssiin erytromysiinille, klindamysiinille ja streptogramiini B: lle. Tämä mekanismi voi olla
- konstitutiivinen, jossa rRNA-metylaasia tuotetaan aina,
Jos In vitro-testi tehdään Staphylococcus aureus-isolaatit, joilla on konstitutiivinen resistenssi, ovat resistenttejä erytromysiinille ja klindamysiinille. - tai voi olla indusoituva, kun metylaasia tuotetaan vain indusoivan aineen läsnä ollessa (Huom.erytromysiini on tehokas makrolidi-linkosamidi-streptogramiini B (MLSB) – resistenssin indusoija). Indusoituvan resistenssin omaavat isolaatit ovat resistenttejä erytromysiinille, mutta rutiininomaisissa invitro-testeissä ne vaikuttavat herkiltä klindamysiinille.
Indusoituvan Klindamysiiniresistenssitestin (D-testi) kliininen merkitys
klindamysiini on erinomaisten farmakokineettisten ja farmakodynaamisten ominaisuuksiensa vuoksi houkutteleva aine S. aureus-infektioepäilyjen empiirisessä hoidossa. MRSA-infektioiden hoidossa klindamysiiniherkillä mutta erytromysiinille resistenteillä kannoilla on todettu kliinisiä epäonnistumisia. Epäonnistumiset johtuivat indusoituvasta resistenssistä klindamysiinille.
tällaisissa tapauksissa In vivo Klindamysiinihoito voi valita konstitutiivisia erm-mutantteja, mikä voi johtaa kliiniseen epäonnistumiseen. Klindamysiiniresistenssi voi olla konstitutiivinen tai indusoituva. Rutiininomaiset antibioottiherkkyystestit eivät pysty tunnistamaan näitä kantoja. Indusoituvan klindamysiiniresistenssin osoittamiseen käytetään d-testiä (inducible clindamycin resistance).
Indusoituvan Klindamysiiniresistenssin (D) testi:
- valmista 0.5 McFarland Standardisuspensio erytromysiinille resistenteille Staphylococcus aureus-isolaateille
- tekevät nurmiviljelmän bakteereista Muller Hinton Agar (MHA) – levyissä.
- laita klindamysiinin (2-µg ) ja erytromysiinin (15-µg ) levyt noin 15 mm: n päähän toisistaan (mitattu reunasta reunaan).
- inkuboidaan levyä 16-18 tuntia 37 oC: ssa
d-testin tuloksen tulkinta
klindamysiinilevyn ympärillä oleva selkeä, D: n muotoinen inhibitioalue on nimetty d-fenotyypiksi, joka merkitään D: ksi tai D+: ksi. Levynhajoamistuloksissa havaitaan myös neljä muuta ei-induktiofenotyyppiä (nimetään negatiiviseksi , utuiseksi D-vyöhykkeeksi , resistentiksi ja herkäksi)