Introduzione
La co-immunoprecipitazione, Co-IP in breve, è una tecnica ampiamente applicata per identificare le interazioni proteina-proteina fisiologicamente rilevanti utilizzando anticorpi specifici per proteine bersaglio per catturare indirettamente le proteine che sono legate a questa specifica proteina bersaglio. Come estensione dell’IP, Co-IP può catturare e purificare non solo il target primario, ma anche altre macromolecole che si legano al target tramite interazioni native. La differenza tra IP e co-IP è al centro dell’esperimento. L’IP è focalizzato sull’obiettivo primario, che lega l’anticorpo. Mentre, Co-IP si rivolge agli obiettivi secondari, che interagisce con le proteine primarie, invece di anticorpo. Dopo l’immunoprecipitazione, le proteine intrappolate sulle perle vengono lavate ed eluite per ottenere proteine bersaglio primarie e secondarie purificate. Queste proteine bersaglio possono essere caratterizzate in vari metodi, come WesternBlot e analisi delle spec di massa sotto strategia shotgun, per identificare ID proteici partner, affinità di legame, cinetica di legame e funzioni non scoperte della proteina primaria.
Fattori critici sul Co-IP:
Come tecnica potente, il Co-IP viene utilizzato regolarmente dai biochimici per esplorare le interazioni proteina–proteina. Mentre la metodologia Co-IP è semplice, identificare le interazioni fisiologiche proteina-proteina attraverso la reazione Co-IP non è facile, a causa dell’instabilità dell’interazione, del legame non specifico con i reagenti IP e della contaminazione anticorpale. Tutti i problemi di cui sopra possono avere effetti negativi sulla rilevazione delle interazioni proteina-proteina.
Co-IP di complessi proteici
Poiché il Co-IP dipende dalle interazioni proteina-proteina per rilevare le proteine legate, l’affinità di legame e la stabilità delle interazioni fisiologiche durante l’intero processo di Co-IP è molto importante. Il tempo di legame inadeguato e le ampie fasi di lavaggio possono ridurre l’efficienza di legame e causare un fallimento nel rilevamento dell’interazione proteica. Pertanto, per le proteine, che si prevede abbiano affinità di legame settimanale o interazioni dinamiche, è necessaria una stabilizzazione anticipata delle interazioni proteina-proteina, ad esempio, i processi di reticolazione possono essere eseguiti prima della Co-IP.
Interazioni aspecifiche
La rottura della membrana cellulare e degli organelli causa il rilascio di grandi quantità di proteine, che sono separate dal confine, per entrare in contatto. Pertanto, è inevitabile che si verifichino interazioni non specifiche, in altre parole, interazioni false positive, che interferiscono con l’analisi dei dati. Ciò è particolarmente comune per le proteine che hanno regioni dispiegate o flessibili, che sono relativamente appiccicose e si legano in modo non specifico ad altre proteine. Modi per rivivere tali problemi possono essere preclearance di lisato utilizzando anticorpi primari per rimuovere le proteine aspecifiche, e cambiando la forza ionica del buffer per ridurre il legame aspecifico.
Creative Proteomics può fornire un design sperimentale personalizzato e perfezionare i parametri Co-IP in base alle esigenze dei clienti. Promettiamo un’analisi Co-IP affidabile delle interazioni proteina-proteina con i nostri esperti scienziati e tecnici.
le Caratteristiche di Co-IP:
- Studiare le interazioni tra proteine e complessi proteici
- controllare le dinamiche di interazione della proteina
- Studio di interazione proteina-proteina in un non denaturante condizione, che è quasi fisiologico
- Mappatura interagenti domini di proteine
il Nostro Co-IP service contiene:
- design dell’Esperimento in base alle vostre specifiche esigenze di progetto: buffer, perline, anticorpi, ecc.
- ottimizzazione dei Parametri, ad esempio l’associazione di durata
- la lisi Cellulare, IP, lavaggio & eluizione
- WesternBlot/ spettrometria di massa, a seconda delle esigenze di progetto
- analisi dei Dati & rapporto di consegna
la Procedura di Ordinazione:
