Panoramica: Con questo metodo creeremo una siringa piena di spore pulita e priva di contaminanti. La siringa sarà riempita con acqua riscaldata e sterilizzata e lasciata raffreddare. Le spore saranno quindi trasferite dalla stampa di spore nella soluzione della siringa utilizzando un bicchierino pulito e sanificato. Al completamento di questo Tek avrete creato una siringa di soluzione di spore pronta per l’uso in qualsiasi applicazione di microscopia.
NOTA: Queste istruzioni sono più efficaci se eseguite nell’ambiente più sterile disponibile. Il metodo preferito consiste nel seguire i passaggi seguenti mentre si lavora in un vano portaoggetti pulito e sterile o davanti a una cappa a flusso laminare. Se non si desidera costruire un cassetto portaoggetti, o non ne avete uno, i seguenti passaggi sono stati eseguiti con successo lavorando su un piano di lavoro accuratamente pulito e sanificato. L’uso liberale di disinfettante spray e soluzione di candeggina diluita è raccomandato per la pulizia e la sanificazione dell’area di lavoro.
Materiali necessari:
Siringhe sterili vuote
Due litri (o più grandi) Pentola da cucina
Una bottiglia di alcool isopropilico al 91%
Diversi asciugamani di carta
Un accendino o fiamma alcolica
Un bicchierino
Stampa di spore sterili
Procedura Uno: Fare una siringa sterile
1. Riempi la pentola a metà con acqua di rubinetto o distillata (usa acqua distillata se l’acqua del rubinetto contiene livelli più alti di minerali e sostanze chimiche).
2. Far bollire l’acqua nella pentola in alto per un minimo di dieci minuti, questo dovrebbe essere sufficiente per sterilizzare e pulire l’acqua di tutti i batteri, virus e spore di muffe.
3. Prendi la siringa vuota e riempila con acqua bollente. Lasciare riposare per due minuti con l’acqua calda all’interno. (Se la siringa era confezionata per sterilità, saltare i passaggi 4 e 5).
4. Spurgare l’acqua calda dalla siringa in un lavandino, non di nuovo nella casseruola.
5. Ripetere i passaggi 3 e 4 altre due volte. Alla seconda volta lasciare l’acqua calda nella siringa.
6. Collocare la siringa in un luogo fresco e privo di correnti d’aria, preferibilmente in un sacchetto pulito con chiusura a zip
7. Lasciare raffreddare per diverse ore prima di procedere alla Procedura due.
Procedura Due: Trasferimento delle spore di stampa nella siringa
1. Prima pulisci la tua area di lavoro. Ciò può comportare la pulizia di tutte le superfici di lavoro con una soluzione di candeggina diluita e la spruzzatura dell’area con un disinfettante come il Lisolo.
2. Disponga i seguenti materiali nel vostro glovebox o sulla superficie di lavoro pulita e sanatized: Il vetro di colpo, le vostre siringhe raffreddate, la bottiglia di alcool, un tovagliolo di carta, la vostra stampa (ancora nel baggie della chiusura lampo) e la fiamma dell’alcool o dell’accendino.
3. Lavarsi le mani con sapone antibatterico prima di procedere ulteriormente.
4. Piegare il tovagliolo di carta in ¼ sezioni e immergere un angolo di esso con l’alcool.
5. Con l’asciugamano imbevuto di alcool pulire l’interno del bicchierino, essenzialmente sterilizzando la superficie che si sta per utilizzare nel trasferimento. Lasciare asciugare il bicchierino all’aria, dovrebbe richiedere solo pochi secondi.
6. Rimuovere il cappuccio protettivo dell’ago dalla siringa sterile e sterilizzare l’ago con la fiamma. Quindi prendere il tovagliolo di carta imbevuto di alcool e pulire l’ago per aiutare ulteriormente nella sterilizzazione. Cerchi di evitare che l’ago tocchi qualsiasi altra superficie se non diversamente indicato.
7.NOTA: a questo punto è importante lavorare il più rapidamente possibile per aiutare a combattere le possibilità di contaminare muffe e batteri che cadono nell’area di lavoro e quindi rovinare la siringa.
8. Rimuovere la stampa dal suo deposito baggie. Aprilo per esporre le spore. Iniziare leggermente a raschiare, usando l’ago della siringa, una sezione della stampa nel bicchierino. Per una stampa di medie dimensioni di solito è sufficiente raschiare una sezione non più grande di 1/5 della stampa totale.
9. Avrai una piccola collezione notevole di spore nel bicchierino. Ora espungere non più della metà dell’acqua dalla siringa nel bicchierino, mescolando leggermente le spore nella soluzione.
10. Aspirare la soluzione acquosa di spore nella siringa. Potrebbe essere necessario espungere un po ‘ di acqua nel bicchierino e risucchiare per aiutare a catturare tutte le spore nella siringa.
11. Una volta che avete la soluzione di spore di nuovo nella siringa si dovrebbe notare che l “acqua all” interno è diventato leggermente colorato e si possono vedere piccoli gruppi di spore galleggianti nella soluzione. Questo è buono, hai completato il processo.
12. Sterilizzare nuovamente l’ago con il tovagliolo di carta imbevuto di alcool, sostituire la protezione dell’ago e rimettere la siringa nella borsa pulita con chiusura a zip.
13. Lasciare riposare la siringa per non meno di 12 ore prima dell’uso in applicazione di microscopia o inoculazione per varietà commestibili. Più vecchia è la stampa utilizzata, più” disidratate ” diventeranno le spore. Per una corretta osservazione al microscopio o germinazione, le spore dovranno essere lasciate reidratare.