Descrizione
Thermo Scientific Pierce Il reagente di Ellman (DTNB) reagisce con gruppi sulfidrilici per produrre un prodotto colorato, fornendo un metodo affidabile per misurare cisteine ridotte e altri sulfidrili liberi in soluzione.
Il reagente di Ellman (5,5′-ditio-bis-) viene utilizzato per stimare i gruppi sulfidrilici in un campione confrontando una curva standard di un composto contenente sulfidrile come la cisteina. In alternativa, i gruppi sulfidrilici possono essere analizzati utilizzando il coefficiente di estinzione di TNB (14.150 M-1 cm-1 a 412 nm). Il reagente di Ellman è stato utilizzato per applicazioni diverse dalla stima sulfidrilica, come per determinare gli alchiltioli mediante HPLC utilizzando una procedura di derivatizzazione pre-colonna e per studiare i tioli nel sito attivo di diversi enzimi.
Caratteristiche del reagente di Ellman:
• Saggio sulfidrilico-reagisce quantitativamente con gruppi sulfidrilici liberi (ridotti) (- SH) per produrre un prodotto TNB rilevabile
• Rilevamento colorimetrico—il prodotto colorato consente la misurazione spettrofotometrica in cuvette o micropiastre (λmax = 412nm; ε = 14,150/M·cm)
• metodo Collaudato—ben caratterizzati chimica fornisce la quantificazione del peptide o proteina i gruppi sulfidrilici utilizzando il coefficiente di estinzione di calcolo o mediante confronto con una cisteina standard
Reagente di Proprietà
• i nomi Alternativi: DTNB, Reagente di Ellman
• nome Chimico: 5,5′-dithio-bis-(2-nitrobenzoic acid)
• Reattivo verso: i gruppi Sulfidrilici (—SH)
• formula Chimica: C14H8N2O8S2
• numero CAS: 69-78-3
• peso Molecolare: 396.35
• Forma: Polvere cristallina gialla
DTNB reagisce con un gruppo sulfidrilico libero per produrre un disolfuro misto e acido 2-nitro-5-tiobenzoico (TNB). L’obiettivo di DTNB in questa reazione è la base coniugata (R—S-) di un gruppo sulfidrilico libero. Pertanto, la velocità di questa reazione dipende da diversi fattori: (1) il pH di reazione, (2) il pKa’ del sulfidrile e (3) gli effetti sterici ed elettrostatici. TNB è la specie colorata prodotta in questa reazione e ha un alto coefficiente di estinzione molare nell’intervallo visibile. Il coefficiente di estinzione molare di TNB è stato originariamente riportato da Ellman (1959) per essere 13.600 M-1 cm-1 a 412 nm e pH 8.0. Di conseguenza, questo valore è stato citato frequentemente in letteratura. Studi successivi hanno dimostrato, tuttavia, che il coefficiente di estinzione molare è più accuratamente riflesso da un valore di 14.150 M-1 cm-1 a 412 nm. L’estinzione del TNB non è influenzata da cambiamenti nel pH tra 7.6 e 8.6. Tuttavia, l’estinzione del TNB è diversa in altri solventi.