La zona pellucida è acellulare cappotto che circonda la membrana plasmatica della crescita completa dei mammiferi ovociti e che esegue una varietà di funzioni importanti durante l’ovogenesi, la fecondazione, e lo sviluppo preimpianto. In questa indagine le proteine della zona pellucida dell’ovocita di topo sono state identificate e caratterizzate utilizzando zonae pellucidae isolate individualmente da ovociti completamente coltivati con micropipeti azionati dalla bocca. Vari criteri morfologici e biochimici sono stati impiegati per valutare la purezza delle zonae pellucidae isolate e, nella maggior parte dei casi, sono risultati essere praticamente privi di contaminazione da altre proteine degli ovociti. È stato stabilito che ogni zona pellucida contiene 4.8 ng di proteine, che rappresentano l ‘ 80% o più del peso secco della zona pellucida e circa il 17% della proteina totale dell’ovocita. Le analisi elettroforetiche di cinque zonae pellucidae isolate trattate con acido iodosulfanilico diazotizzato hanno rivelato la presenza di sole tre proteine radiomarcate, designate ZP1, ZP2 e ZP3. Le stesse tre proteine sono state identificate mediante colorazione blu di Coomassie quando un gran numero di zonae pellucidae isolate (circa 750) sono state sottoposte ad elettroforesi su gel SDS-poliacrilammide. Queste tre proteine migrano come bande larghe su gel SDS-poliacrilammide, coerenti con il loro essere glicoproteine, con pesi molecolari apparenti di 200.000 (ZP1), 120.000 (ZP2) e 83.000 (ZP3). Le stesse proteine sono state radiomarcate quando gli ovociti intatti sono stati trattati con acido iodosulfanilico diazotizzato, un reagente che non penetra nella membrana plasmatica dell’ovocita, o quando le zonae pellucidae isolate sono state trattate con cloruro di 1-dimetilamminonaftalene-5-solfonile marcato con 3H. I risultati dell’analisi degli amminoacidi e dell’elettroforesi bidimensionale ad alta risoluzione delle singole proteine suggeriscono che ogni proteina rappresenta una catena polipeptidica unica. Le proteine ZP1, ZP2 e ZP3 rappresentano rispettivamente circa il 36, il 47 e il 17% della proteina totale della zona pellucida. In presenza di agenti riducenti che causano la dissoluzione della zona pellucida, ZP1 viene convertito in una specie che migra con un peso molecolare apparente di 130.000, suggerendo che esiste come oligomero, stabilizzato da legami disolfuro, allo stato non ridotto. I risultati di questi esperimenti sono discussi in termini di proprietà della zona pellucida prima e dopo la fecondazione e sono confrontati con i risultati ottenuti utilizzando involucri di vitellina di uova di specie animali non mammarie.