Inducibile clindamycin resistenza in stafilococchi possono essere rilevati dal metodo di diffusione su disco utilizzando la Clindamicina Eritromicina e dischi. Il test D viene eseguito mediante diffusione del disco, posizionando un disco di eritromicina da 15 µg in prossimità di un disco di clindamicina da 2 µg su una piastra di agar che è stata inoculata con un isolato stafilococcico; la piastra viene quindi incubata durante la notte.
Un appiattimento della zona di inibizione intorno Clindamycin disco prossimale dell’Eritromicina disco (con la realizzazione di una zona di inibizione a forma di come la lettera D) è considerato un risultato positivo e indica che l’Eritromicina ha indotto Clindamycin resistenza (positivo “D-zone di prova”). Per gli isolati resistenti all’eritromicina, i test di induzione possono aiutare i laboratori a determinare se i risultati per la clindamicina devono essere segnalati come sensibili (quando il test di induzione è negativo) o come resistenti (quando il test di induzione è positivo).
Meccanismo d’azione dell’eritromicina e della clindamicina e Sviluppo di resistenza
L’eritromicina (un macrolide) e la clindamicina (una lincosamide) rappresentano due classi distinte di agenti antimicrobici che inibiscono la sintesi proteica legandosi alle subunità ribosomiali 50S delle cellule batteriche. Negli stafilococchi, la resistenza a entrambi questi agenti antimicrobici può verificarsi attraverso la metilazione del loro sito bersaglio ribosomiale. Tale resistenza è tipicamente mediata da geni erm.
Significato clinico della resistenza inducibile alla clindamicina:
La resistenza macrolide-lincosamide-streptogramina B (MLSB), che è mediata dal meccanismo di modifica del lato bersaglio, provoca resistenza all’eritromicina, alla clindamicina e alla streptogramina B. Questo meccanismo può essere
- Costitutivo, dove viene sempre prodotta la rRNA metilasi,
Se vengono eseguiti test in vitro Gli isolati di Staphylococcus aureus con resistenza costitutiva sono resistenti all’eritromicina e alla clindamicina. - O può essere inducibile, dove la metilasi viene prodotta solo in presenza di un agente induttore (Nota: l’eritromicina è un induttore efficace della resistenza macrolide-lincosamide-streptogramina B (MLSB)). Gli isolati con resistenza inducibile sono resistenti all’eritromicina ma appaiono suscettibili alla clindamicina nei test invitro di routine.
Significato clinico della prova inducibile di resistenza della clindamicina (prova di D)
La clindamicina è un agente attraente per la terapia empirica per le infezioni sospette di S. aureus a causa delle sue proprietà farmacocinetiche e farmacodinamiche eccellenti. Sono stati documentati fallimenti clinici della terapia con clindamicina per il trattamento delle infezioni da MRSA per ceppi sensibili alla clindamicina ma resistenti all’eritromicina. I fallimenti erano dovuti alla resistenza inducibile alla clindamicina.
In tali casi, In vivo, la terapia con clindamicina può selezionare per mutanti costitutivi erm, che possono portare a fallimento clinico. La resistenza alla clindamicina può essere costitutiva o inducibile. I test di suscettibilità agli antibiotici di routine non sono in grado di identificare questi ceppi. La prova di D (resistenza inducibile della clindamicina) è impiegata per individuare la resistenza inducibile della clindamicina.
Procedura per la prova inducibile di resistenza alla clindamicina (D):
- Preparare 0.5 McFarland sospensione standard di eritromicina resistente Staphylococcus aureus isolati
- Fare una coltura prato di batteri in Muller Hinton Agar (MHA) piastre.
- Mettere i dischi di clindamicina (2-µg ) ed eritromicina (15-µg ) a circa 15 mm di distanza (misurata da bordo a bordo).
- Incubare la piastra per 16-18 ore a 37oC
Interpretazione del risultato del test D
Una chiara zona di inibizione a forma di D attorno al disco di clindamicina è designata come fenotipo D etichettato come D o D+. Altri quattro fenotipi non induttivi (designati come zona D negativa , nebulosa , resistente e suscettibile ) sono osservati anche nei risultati di diffusione del disco