InoculationEdit
tecnici di Laboratorio inoculare il campione su alcuni solidi piastre di agar con la striscia metodo con piastra o nel liquido di coltura, a seconda di ciò che l’obiettivo di isolamento:
- Se si vuole isolare solo un particolare gruppo di batteri, come il Gruppo A Streptococcus da un tampone di gola, è possibile utilizzare un terreno selettivo che si sopprime la crescita concomitante di batteri previsto nel mix (da antibiotici presenti nell’agar), in modo che solo gli Streptococchi sono “selezionati”, cioè visibilmente stand out. Per isolare i funghi, è possibile utilizzare l’agar Sabouraud. In alternativa, condizioni letali per streptococchi e batteri gram negativi come alte concentrazioni di sale in mannitolo agar favorire la sopravvivenza di qualsiasi stafilococchi presenti in un campione di batteri intestinali, e fenolo rosso in agar agisce come un indicatore di pH che mostra se i batteri sono in grado di fermentare mannitolo espellendo acido nel mezzo. In altri agar vengono aggiunte sostanze per sfruttare la capacità di un organismo di produrre un pigmento visibile (ad es. granada medium per streptococco di Gruppo B) che cambia il colore della colonia batterica, o per sciogliere l’agar del sangue mediante emolisi in modo che possano essere individuati più facilmente. Alcuni batteri come le specie di Legionella richiedono particolari sostanze nutritive o tossina vincolante come nel carbone di legna per crescere e quindi mezzi come tamponato estratto di lievito di carbone agar deve essere utilizzato.
- Se si desidera isolare il maggior numero o tutti i ceppi possibili, è necessario inoculare diversi mezzi nutritivi e mezzi arricchiti, come l’agar del sangue e l’agar del cioccolato e terreni di coltura anaerobici come il brodo di tioglicolato. Per enumerare la crescita, i batteri possono essere sospesi in agar fuso prima che diventi solido e quindi versati in piastre di petri, il cosiddetto “metodo di versamento della piastra” utilizzato in microbiologia ambientale e microbiologia alimentare (ad esempio test lattiero-caseari) per stabilire il cosiddetto “conteggio aerobico della piastra”.
IncubationEdit
Dopo che il campione è inoculato in o su la scelta dei media, che sono incubate in appropriato e ricco di atmosfera, come aerobica, anaerobica o microaerofili o con aggiunta di anidride carbonica (5%), a diverse impostazioni di temperatura, per esempio 37 °C in un incubatore o in frigorifero per un arricchimento a freddo, sotto la luce adeguata, per esempio rigorosamente senza luce avvolto in un foglio di carta o in una bottiglia scura per scotochromogen micobatteri, e per periodi di tempo diversi, perché diversi batteri crescono a velocità diverse, e diverse da ore (Escherichia coli) a settimane (ad es. micobatteri).
A intervalli regolari, i tecnici di laboratorio e i microbiologi ispezionano i supporti per i segni di crescita visibile e li registrano. L’ispezione deve ancora avvenire in condizioni favorevoli alla sopravvivenza dell’isolato, cioè in una “camera anaerobica” per i batteri anaerobi, ad esempio, e in condizioni che non minacciano la persona che guarda le piastre di essere infettata da un microbo particolarmente infettivo, cioè sotto un gabinetto di sicurezza biologica per Yersinia pestis (peste) o Bacillus anthracis (antrace) per esempio.
Identificazionemodifica
Quando i batteri sono visibilmente cresciuti, spesso sono ancora mescolati. L’identificazione di un microbo dipende dall’isolamento di una singola colonia, come il test biochimico di un microbo per determinare le sue diverse funzioni fisiologiche dipende da una coltura pura.Per fare una sottocultura, una volta le opere in tecnica asettica in microbiologia, il sollevamento di una singola colonia di sconto superficie agar con un loop e strisce il materiale in 4 quadranti di una piastra di agar o tutto se la colonia è stata singolare e non guardare misto.
Colorazione di gram il campione grezzo prima dell’incubazione o la colorazione del materiale di colonia appena coltivato aiuta a determinare se una colonia è costituita da batteri che appaiono uniformemente o è mista, e il colore e la forma dei batteri consentono una prima classificazione basata sulla morfologia. In microbiologia clinica numerose altre tecniche di colorazione per organismi particolari sono utilizzati (acido veloce macchia batterica per micobatteri). Sono state sviluppate tecniche di colorazione immunologica, come l’immunofluorescenza diretta per patogeni medicalmente importanti a crescita lenta (macchia Auramina-rodamina per micobatteri) o difficili da coltivare (come le specie di Legionella pneumophila) e in cui il risultato del test altererebbe la gestione standard e la terapia empirica.
La prova biochimica dei batteri comprende una serie di agar in fiale per separare il motile dal non-motile bacteria.In 1970 è stata sviluppata una versione miniaturizzata, chiamata indice di profilo analitico.
Identificazione riuscita tramite ad es. il sequenziamento del genoma e la genomica dipendono da colture pure.