Che cos’è la macchia di Verhoeff-van Gieson?
Ira Van Gieson descrisse per la prima volta il protocollo di colorazione Verhoeff-van Gieson (VVG) nel 1889 come metodo per valutare le fibre di collagene nel tessuto neurale. Frederick Herman Verhoeff, un chirurgo e patologo americano, ha poi modificato la macchia nel 1908, come metodo per differenziare il collagene e altri tessuti connettivi, ed evidenziare le fibre elastiche in particolare.
Cosa macchia?
Le fibre elastiche sono fibre del tessuto connettivo che consentono ai tessuti di allungarsi e sono abbondanti nell’aorta, ad esempio, dove forniscono flessibilità a questo grande vaso sanguigno. Sono presenti anche in altri tessuti che necessitano di flessibilità, come la pelle e il polmone.
Queste fibre elastiche sottili non possono essere viste in genere su sezioni di tessuto macchiate di ematossilina ed eosina (H&E), pertanto sono necessarie macchie speciali per evidenziarle. Puoi leggere di più su H &E in questi articoli dal canale di microscopia e imaging-Parte 1:Metodo e suggerimenti, Parte 2: Ricette e materiali.
Sebbene ci siano numerose macchie speciali per l’identificazione delle fibre elastiche, VVG è più comunemente usato perché è veloce e produce una colorazione intensa delle fibre elastiche.
principi Generali della macchia
LCA è la combinazione di macchia che consente la differenziazione di alcuni componenti del tessuto connettivo in un tessuto che non sono facilmente distinguibili da H&E colorazione:
Verhoeff macchia componente: un ferro da stiro-le colorazioni ematossilina macchia che è specifico per le fibre elastiche. Forma forti legami con l’elastina, il componente principale del tessuto connettivo elastico.
van Gieson stain component: un controstain specifico per il collagene. Prende il nome dal batteriologo americano Ira van Gieson e comprende due coloranti acidi: acido picrico e fucsina acida.
La tecnica prevede la colorazione del campione di tessuto con una macchia di ematossilina composta da cloruro ferrico e iodio, e comprende due fasi principali:
(1) Sovrasterzo: questa fase comporta un complesso di ematossilina–cloruro ferrico–iodio. Questi ultimi due componenti agiscono come mordenti per fissare la macchia di ematossilina ai tessuti e agiscono anche come agenti ossidanti per aiutare a convertire l’ematossilina in emateina. Il meccanismo di colorazione probabilmente comporta la formazione di legami idrogeno tra l’ematossilina e il tessuto, sebbene le specifiche di questa reazione non siano ben note. Poiché l’elastina ha una forte affinità per il complesso ferro-ematossilina nella macchia, trattiene il colorante più a lungo rispetto ad altri componenti del tessuto. L’elastina rimane quindi macchiata anche dopo che altri elementi del tessuto sono stati decolorati.
(2) Differenziazione: questo punto usa il mordente ferrico in eccesso del cloruro per scomporre il complesso del tessuto-mordente-colorante. Il tiosolfato di sodio viene utilizzato per rimuovere lo iodio in eccesso e il controstenere van Gieson viene utilizzato per produrre contrasto con la macchia di ematossilina. Il colorante è attratto dal grande volume di mordente nella soluzione differenziante e rimosso dal tessuto. Il tessuto elastico, d’altra parte, ha la più forte affinità per la componente di ferro della macchia.
Di conseguenza, il prodotto finale della reazione è tale che le fibre elastiche e i nuclei cellulari sono macchiati di nero dal componente Verhoeff. Il collagene ed il muscolo sono macchiati di rosso dal controstain di van Gieson, che inoltre provoca la colorazione gialla del citoplasma delle cellule e di altre componenti del tessuto.
Chi usa Van Gieson stain?
Questa macchia è ampiamente utilizzata sia per scopi diagnostici che di ricerca.
Nei laboratori diagnostici, VVG viene utilizzato per identificare la presenza o l’assenza di fibre elastiche nei tessuti. Ad esempio, i patologi possono usarlo per dimostrare la perdita di tessuto elastico nel polmone nei pazienti con enfisema e l’assottigliamento e la perdita di fibre elastiche nei vasi sanguigni dei pazienti con arteriosclerosi.
Allo stesso modo, i ricercatori che studiano uno di questi tipi di malattie possono anche esaminare regolarmente sezioni di tessuto macchiate di VVG per rilevare la presenza o l’assenza di fibre elastiche nei tessuti di interesse. Altri ricercatori possono semplicemente utilizzare la macchia semplicemente per differenziare le fibre del tessuto connettivo nei tessuti di interesse.
Come si usa Verhoeff-van Gieson stain nel proprio laboratorio?
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