はじめに
Co-immunoprecipitation、Co-IPは、この特定の標的タンパク質に結合しているタンパク質を間接的に捕捉するために標的タンパク質特異的抗体を利用することにより、生理学的に関連するタンパク質-タンパク質相互作用を同定するために広く適用されている技術である。 IPの拡張として、Co-IPは、一次標的だけでなく、天然の相互作用によって標的に結合する他の高分子も捕捉し、精製することができる。 IPとco-IPの違いは、実験の焦点です。 IPは、抗体に結合する一次標的に焦点を当てている。 一方、Co-IPは、抗体の代わりに一次タンパク質と相互作用する二次標的を標的とする。 免疫沈降後、ビーズ上に捕捉されたタンパク質を洗浄し、溶出させて、精製された一次標的タンパク質および二次標的タンパク質を得る。 これらの標的タンパク質は、パートナータンパク質Id、結合親和性、結合の速度論および一次タンパク質の未発見の機能を同定するために、散弾銃戦略の下でWesternBlotおよびmass spec分析などの様々な方法で特徴付けることができる。
Co-IPに関する重要な要因：
強力な技術として、Co-IPは、タンパク質-タンパク質相互作用を探索するために生化学者によって定期的に利用されている。 Co-IPの方法論は簡単ですが、Co-IP反応を介して生理学的なタンパク質-タンパク質相互作用を同定することは、相互作用の不安定性、IP試薬への非特異的結合、抗体汚染のために容易ではありません。 上記のすべての問題は、タンパク質-タンパク質相互作用の検出に悪影響を及ぼす可能性があります。
タンパク質複合体のCo-IP
Co-IPは、結合したタンパク質を検出するためにタンパク質-タンパク質相互作用に依存するため、Co-IPプロセス全体の間の生理的相互作用の結合親和性および安定性は非常に重要である。 不十分な結合時間および広範な洗浄工程は、結合効率を低下させ、タンパク質相互作用の検出の失敗を引き起こす可能性がある。 したがって、結合親和性や動的相互作用を有すると予測されるタンパク質については、タンパク質-タンパク質相互作用の事前安定化が必要であり、例えば、co-IPの前に架橋プロセスを行うことができる。
非特異的相互作用
細胞膜とオルガネラの破損は、境界によって分離された大量のタンパク質の放出を引き起こし、接触させる。 したがって、非特異的相互作用、言い換えれば、偽陽性相互作用が起こり、データ分析を妨害することは避けられない。 これは比較的粘着性があり、unspecifically他の蛋白質を結合する展開されたか、または適用範囲が広い領域がある蛋白質のために特に共通です。 このような問題を追体験する方法は、一次抗体を使用して非特異的タンパク質を除去し、非特異的結合を減少させるために緩衝液のイオン強度を変
創造的なProteomicsは注文の実験設計を提供し、顧客の必要性に基づいてCo-IP変数を精製できます。 私達は私達のベテランの科学者および技術者との蛋白質-蛋白質の相互作用の信頼できるCo-IPの分析を約束します。
Co-IPサービスの特徴：
- タンパク質とタンパク質複合体との相互作用を研究
- タンパク質相互作用のダイナミクスを監視
- タンパク質の相互作用ドメインをマッピングする
私たちのCo-IPサービスが含まれています：
- あなたの特定のプロジェクトのニーズに基づいて実験設計：バッファ、ビーズ、抗体など…..
- このような結合時間などのパラメータの最適化、
- 細胞溶解、IP、洗浄&溶出
- WesternBlot/質量分析、プロジェクトのニーズに応じて
- データ分析&レポート配信
注文手順：
