David A Weitz's Lab

細胞分泌分子、例えばサイトカインの定量化は、免疫応答の特性評価の基本的なものです。 分泌された分子を分泌細胞に固定するために設計された抗体を使用するサイトカインキャプチャアッセイは、感受性の高い同定と生存可能な応答細胞の回復の両方を可能にするため、免疫応答を特徴付けるために広く使用されている。 しかし、サイトカインが分泌細胞から離れて拡散する場合、非分泌細胞も応答細胞として同定されるであろう。 ここでは、マイクロ流体液滴に免疫細胞をカプセル化し、分泌されたサイトカインの拡散を制限するために液滴内サイトカインキャプチャアッセイを 我々は急速にマイクロ流体液滴に単一のナチュラルキラー NK-92MI細胞とそのターゲットK562細胞をカプセル化するためにマイクロ流体デバイスを使用し 本発明者らは、液滴内IFN-γ捕捉アッセイを行い、nk-92MI細胞が液滴内の標的細胞を認識し、IFN-γを分泌するように活性化されることを実証する。 液滴封入は、隣接する細胞への分泌産物の拡散を防止し、液滴なしで実施されるアッセイと比較して、偽陽性および偽陰性の両方を劇的に減少させる。 1%の真陽性を含む試料では、封入は、陰性として現れる真陽性細胞の数を9 4%から2%に減少させ、5 0%の真陽性を含む試料では、陽性として現れる非刺激細胞の数を9 8%から1%に減少させる。 細胞が液滴から放出された後、分泌されたサイトカインは、分泌免疫細胞上に捕捉されたままであり、活性化されたエフェクター免疫細胞に高度に富化された集団のFACS単離を可能にする。 液滴封入は、背景を減少させ、任意の単細胞分泌アッセイの検出を改善するために使用することができる。

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