ECMタンパク質について

疾患における役割

ECM成分の異常な調節または遺伝的欠陥は、しばしば病原性状態をもたらす。遺伝性疾患:黄斑変性疾患を含むいくつかの疾患がECM遺伝子の突然変異によって引き起こされることが示されている(Fibulin3、ref. 6)、変形性関節症(Asporin,ref. および先天性筋ジストロフィー(Laminins,ref. 8).癌および転移:所与のECMタンパク質の発現の変化が癌と相関していることを示す多くの例がある(9)。

癌および転移:所与のECMタンパク質の発現の変化が癌と相関していることを示す多くの例がある。 また、マトリックスメタロプロテイナーゼの作用を介したECMの分解は、癌細胞の転移性浸潤の前提条件であることも十分に確立されている(10)。アテローム性動脈硬化症:この疾患は、コラーゲンプラーク(の蓄積にリンクされている11)。

アテローム性動脈硬化症:この疾患は、コラーゲンプラーク(の蓄積にリン再生医療と組織工学の分野は、与えられた細胞型(から組織や臓器の予測可能な形成を生成しようとするECMコンポーネントを利用している12,13)。

ECMを研究するために使用されるアッセイ

市販のECM試薬および細胞付着/侵入アッセイの優位性があります。

ECM試薬および細胞付着/侵入アッセイ ECM試薬の中で最もよく知られているものは、ENGELBRETH−Holm−Swarmマウス腫瘍からのECM抽出物であるBDからのMatrigeltmである。 MatrigelTMは、ラミニン(56%)、コラーゲンタイプIV(31%)、およびエナクチン(8%)、およびEGF(0.7ng/ml)、PDGF(12ng/ml)、IGF-1(16ng/ml)、およびTGF-a(2.3ng/ml)(14)を含むいくつかの成長因子で構成され 同様の製品には、ECMatrixTM(Millipore)およびECM gel(Sigma)が含まれます。 ほとんどの市販の侵入アッセイは、システム(15)のようなBoydenチャンバーを利用しています。

細胞骨格は、蛍光標識およびビオチン化フィブロネクチンおよびラミニンのユニークなラインを提供しています。 これらの製品のいくつかの用途を以下に示します。アプリケーション#1:in vitro invadopodia/podosome invasion assay(Cat。#FNR01,FNR02,LMN01,LMN02)

細胞骨格の蛍光標識されたフィブロネクチンおよびラミニンは、in vitro invadopodia/podosome invasion assay(16)に使用することができます。 この試金は特定のECMの部品のローカル細胞の侵入の高リゾリューションの検査を可能にし、細胞の侵略的な潜在性を査定し、侵入のこの段階に影響を与 当初はArtym et al. ゼラチンのために、試金は蛍光フィブロネクチンかラミニンに均等に適当です(16)。

アプリケーション#2:フィブロネクチンマトリックスアセンブリに関与するシグナル伝達経路:線維形成(Cat。#FNR01,FNR02,FNR03)

生理的条件下で自己重合することができる他のECM成分とは異なり、フィブロネクチンマトリックスアセンブリは細胞依存性プロセスである。 FNアセンブリに関与するメカニズムを理解し、どのようにこれらの細胞、線維性、および免疫応答との相互作用は、異常な組織修復プロセスを調節する また、組織工学は、ECM形成の速度およびパターンを制御する能力に強く依存する。 細胞骨格の標識されたフィブロネクチンは、線維形成を監視するために使用することができます;

蛍光フィブロネクチン基質(FNR01&FNR02)

この方法は、蛍光フィブロネクチン(17)の取り込みを介してフィブリル形成の蛍光トレー

細胞表面上の可溶性フィブロネクチンの不溶性フィブリルへの変換は、TRITC標識フィブロネクチンのいずれかを含む培地で細胞培養物を供給するこ#FNR01)またはHilyte488標識フィブロネクチン(Cat.#FNR02)。 組み込まれたフィブロネクチンのレベルは、蛍光顕微鏡によって観察および定量することができる(1 8)。

ビオチニル化フィブロネクチン基質(FNR03)

この方法は、目的の細胞にビオチニル化フィブロネクチンを組み込み、洗剤可溶性(細胞結合)および洗剤不溶性(フィブリル)フィブロネクチンを定量する。 このアッセイは、線維形成におけるRhoタンパク質の役割を調べるために正常に使用されている(19)。

アプリケーション#3: 組織工学アプリケーション(FNR03&LMN03)

ビオチニル化ECMタンパク質は、ストレプトアビジン表面に結合したときに、より天然の立体配座を採用することができ、これがECMへの細胞結合を強化することができることが示されている(20)。

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