実験
RuBisCoのラベリング：
Aedans（454）：ドナー F（58）：アクセプター
結合研究：
用語：
ADP弾丸：GroESとADPに結合したGroEL複合体
ApoGroEL：ちょうどGroEL comlex（rubisco基質の以前の結合研究で使用されている）
lin et Al.
1. Ａｄｐ弾丸のｔｒａｎｓリング対ａｐｏｇｒｏｅｌリングへの基質結合時にＦＲＥＴに差があった。
-これはドナー蛍光の消光によって明らかであった（B.)
-これはタンパク質基質の立体配座の違いを示した。
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2. アポグロール環に結合した基質タンパク質の”受動的”な展開を発見した。
-しかし、この展開はGroELの機能的反応サイクルよりもはるかに遅く発生しました。
3. ADPの弾丸のtransリングに区切られる基質のより少ない”受動の”展開があります。
-プロテアーゼ消化の研究でこれを確認しました。
-しかし、これはより生理学的に関連する複合体です。
-これは最大限に効果的なレベルですか、それとも反応サイクルの最初のステップですか？
生理的関連性をテストするために、彼らはADP弾丸反応にATPを追加し、FRETを監視しました
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ATPを追加すると、彼らは: -最初の急速な、強制的な立体配座拡大 基板 -その後、遅い圧縮相 -図bに明らか |
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-図cは、圧縮段階はgroesの集中に依存しています、それは複合体のthesequestrationのメカニズムに依存していることを意味します。
-膨張相はGroES濃度とは無関係である。
展開の二つの段階があると結論付けました：
-GroELチャンバーのトランスリングへの基質結合による遅い受動的な展開（最初の結合実験から）
-GroELチャンバーの立体配座の変化による急速なATP駆動の展開。
Rapid unfoldingはGroES依存ではありません：
-単一環状GroELバリアントの過剰、SR1はGroESトラップとして使用されました。
-SR1は基質に結合し、展開反応を触媒することはできませんが、基質の隔離に対する反応の依存性を決定するためにGroESを結合して隔離することが
-彼らは、フレットによって監視された急速な展開がGroESキャップが存在せずに発生し、その後の圧縮段階は起こらなかったと判断した。
-これは、急速な膨張相がATP結合によって誘導されるGroELの立体配座変化に依存していることを示している。
だから。. 生産的な折り畳みには基板の展開が必要ですか？
-これは重要なステップであり、GroEL/GroESの折り畳み機構にとって重要ですか？
-彼らは、ネイティブではないRuBisCoの割合がネイティブの状態は展開の程度に比例していることを発見しました。
-これを調べるために、彼らはGroEL結合のみによる基質の遅い、受動的な展開を測定したかった（ATP依存ではない）
-彼らは再びSR1結合を基質に利用し、今回はatrapとしてではなく、基質の受動的な展開結合部位として利用した。
-SR1とのインキュベーション時間は、展開が基質の結合のみによるものであるため、展開の量に相関している。
-彼らは、天然タンパク質への展開の量との間に相関があると判断した。
-だから、GroEL/GroESの強制展開は、適切なタンパク質の折り畳みに必要な展開メカニズムを促進するための効率的な方法です。
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