David A Weitz's Lab

kwantificering van cel-uitgescheiden moleculen, bijvoorbeeld cytokines, is fundamenteel voor de karakterisering van immuunresponsen. De analyses van de cytokinevangst die gebouwde antilichamen gebruiken om de afgescheiden molecules aan de afscheidende cellen te verankeren worden wijd gebruikt om immune reacties te karakteriseren omdat zij zowel gevoelige identificatie als terugwinning van levensvatbare reactiecellen toestaan. Echter, als de cytokines diffunderen weg van de afscheidende cellen, niet-afscheidende cellen zullen ook worden geïdentificeerd als reagerende cellen. Hier kapselen wij immune cellen in microfluidic druppeltjes en voeren in-druppelcytokine capture analyses uit om de verspreiding van de afgescheiden cytokines te beperken. Wij gebruiken microfluidic apparaten om de enige cellen van de natuurlijke Moordenaar NK-92 MI en hun doelk562 cellen snel in microfluidic druppels in te kapselen. Wij voeren in-druppel IFN-γ capture assays uit en tonen aan dat de cellen van NK-92 MI doelcellen binnen druppels herkennen en geactiveerd worden om IFN-γ af te scheiden. De inkapseling van het druppeltje verhindert verspreiding van afgescheiden producten aan naburige cellen en vermindert dramatisch zowel valse positieven als valse negatieven, met betrekking tot analyses die zonder druppels worden uitgevoerd. In een monster dat 1% true positieven bevat, vermindert inkapseling van 94% tot 2% het aantal true-positieven dat als negatieven verschijnt; in een monster dat 50% true positieven bevat, wordt het aantal niet-gestimuleerde cellen dat als positieven verschijnt verminderd van 98% tot 1%. Nadat de cellen van de druppeltjes worden vrijgegeven, blijft afgescheiden cytokine gevangen op het afscheiden van immune cellen, die FACS-isolatie van bevolking toelaten hoogst verrijkt voor geactiveerde effector immune cellen. De druppelinkapseling kan worden gebruikt om achtergrond te verminderen en opsporing van om het even welke eencellige secretieanalyse te verbeteren.

Geef een antwoord

Het e-mailadres wordt niet gepubliceerd.