beschrijving
Thermo Scientific Pierce Ellman’ s reagens (Dtnb) reageert met sulfhydrylgroepen om een gekleurd product te produceren, wat een betrouwbare methode biedt om gereduceerde cysteinen en andere vrije sulfhydrylen in oplossing te meten.Ellman ’s reagens (5,5′ – dithio-bis -) wordt gebruikt om sulfhydrylgroepen in een monster te schatten door vergelijking met een standaardkromme van een sulfhydrylhoudende verbinding zoals cysteïne. Alternatief, sulfhydrylgroepen kunnen worden geanalyseerd gebruikend de extinctiecoëfficiënt van TNB (14.150 M-1 cm-1 bij 412nm). Ellman ‘ s reagens is gebruikt voor andere toepassingen dan sulfhydryl schatting, zoals voor het bepalen van alkylthiolen door HPLC met behulp van een pre-column derivatisatie procedure en voor het bestuderen van thiolen in de actieve plaats van verschillende enzymen.kenmerken van Ellman ‘ s reagens:
• Sulfhydryltest-reageert kwantitatief met vrije (gereduceerde) sulfhydrylgroepen (- SH) om detecteerbaar TNB—product te verkrijgen
• colorimetrische detectie-gekleurd product maakt spectrofotometrische metingen in cuvetten of microplaten mogelijk (λmax = 412nm); ε = 14,150/M·cm)
• Bewezen methode—goed-gekenmerkt chemie biedt kwantificering van peptiden of eiwitten sulfhydryl groepen met behulp van extinctie coëfficiënt berekening of door vergelijking met een cysteïne standaard
Reagens Eigenschappen
• Alternatieve namen: DTNB, Ellman ’s Reagens
• Chemische naam: 5,5′-dithio-bis-(2-nitrobenzoic zuur)
• Reactieve naar: Sulfhydryl groepen (—SH)
• Chemische formule: C14H8N2O8S2
• CAS-nummer: 69-78-3
• Moleculaire gewicht: 396.35
• Vorm: Geel kristallijn poeder
dtnb reageert met een vrije sulfhydrylgroep tot een gemengd disulfide en 2-nitro-5-thiobenzoëzuur (TNB). Het doel van DTNB in deze reactie is de geconjugeerde base (R—S-) van een vrije sulfhydrylgroep. Daarom is de snelheid van deze reactie afhankelijk van verschillende factoren: (1) de reactie pH, (2) de pKa’ van de sulfhydryl en (3) sterische en elektrostatische effecten. TNB is de gekleurde soort die in deze reactie wordt geproduceerd en heeft een hoge Molaire extinctiecoëfficiënt in het zichtbare bereik. De molaire extinctiecoëfficiënt van TNB werd oorspronkelijk gemeld door Ellman (1959) 13.600 m-1 cm-1 bij 412 nm en pH 8,0. Deze waarde is dan ook veelvuldig in de literatuur genoemd. Latere studies hebben echter aangetoond dat de molaire extinctiecoëfficiënt nauwkeuriger wordt weergegeven door een waarde van 14.150 M-1 cm-1 bij 412 nm. Het uitsterven van TNB wordt niet beïnvloed door veranderingen in pH tussen 7,6 en 8,6. Het uitsterven van TNB is echter anders in andere oplosmiddelen.