overzicht: met deze methode maken we een schone en contaminant-vrije sporengevulde spuit. De spuit wordt gevuld met verwarmd en gesteriliseerd water en laat afkoelen. De sporen worden vervolgens van de sporenprint overgebracht naar de spuitoplossing met behulp van een gereinigd en ontsmet borrelglas. Bij het voltooien van deze Tek heb je een sporenoplossing spuit klaar gemaakt voor gebruik in elke microscopie toepassing.
opmerking: Deze instructies zijn het meest effectief wanneer ze worden uitgevoerd in de meest steriele omgeving die beschikbaar is. De voorkeursmethode is het volgen van de onderstaande stappen tijdens het werken in een schone en steriele Glovebox of voor een laminaire stroomkap. Als u niet wilt dat een handschoenenkast te bouwen, of hebben geen, de volgende stappen zijn uitgevoerd met succes door te werken aan een grondig gereinigd en ontsmet aanrecht. Ruim gebruik van spray desinfectiemiddel en verdunde bleekoplossing wordt aanbevolen voor het reinigen en ontsmetten van het werkgebied.
benodigd materiaal:
lege steriele spuiten
twee kwart (of groter) kookpot
Een fles van 91% isopropylalcohol
verscheidene papieren handdoeken
een aansteker of alcohol vlam
een borrelglas
steriele sporenafdruk
Procedure één: een steriele spuit maken
1. Vul je kookpot half met kraanwater of gedestilleerd water (gebruik gedestilleerd water als je kraanwater meer mineralen en chemicaliën bevat).
2. Kook het water in de pot op hoog voor een minimum van tien minuten, dit moet voldoende zijn om te steriliseren en reinigt het water van alle bacteriën, virussen en schimmelsporen.
3. Neem uw lege spuit en vul deze met kokend water. Laat het twee minuten zitten met het warme water erin. (Als uw spuit steriliteit verpakt was, slaat u stap 4 en 5 over).
4. Spoel het warme water uit de spuit in een gootsteen, niet terug in de pan.
5. Herhaal stap 3 en 4 nog twee keer. Laat bij de tweede keer het warme water in de spuit.
6. Plaats de spuit op een koele trekvrije plaats, bij voorkeur in een schone zak met ritssluiting
7. Laat het enkele uren afkoelen alvorens over te gaan tot Procedure twee.
Procedure twee: Overzetten van printsporen in spuit
1. Maak eerst je werkruimte schoon. Dit kan inhouden dat alle werkoppervlakken met een verdunde bleekoplossing worden schoongeveegd en het gebied royaal wordt besproeid met een desinfecterend middel zoals Lysol.
2. Plaats de volgende materialen in uw handschoendoos of op het gereinigde en gesanatiseerde werkoppervlak: het borrelglas, uw gekoelde spuiten, de fles alcohol, een papieren handdoek, uw print (nog steeds in zip-lock zakje) en de aansteker of alcohol vlam.
3. Was de handen met antibacteriële zeep voordat u verder gaat.
4. Vouw de papieren handdoek omhoog in ¼ secties en week een hoek van het met de alcohol.
5. Met de alcohol gedrenkte handdoek veeg het interieur van het borrelglas, in wezen steriliseren van het oppervlak dat u op het punt om te gebruiken in de overdracht. Laat het borrelglas aan de lucht drogen, duurt slechts een paar seconden.
6. Verwijder de beschermdop van uw steriele spuit en de vlam steriliseert de naald. Neem dan uw met alcohol doordrenkte papieren handdoek en veeg de naald verder te helpen bij de sterilisatie. Probeer te voorkomen dat de naald een ander oppervlak raakt, tenzij anders aangegeven.
7.Opmerking: Het is belangrijk op dit punt om zo snel mogelijk te werken om te helpen bij het bestrijden van de kans op het besmetten van schimmels en bacteriën vallen in uw werkgebied en daardoor ruïneren uw spuit.
8. Verwijder de print uit de opbergzak. Ontvouw het om de sporen bloot te leggen. Begin lichtjes met de naald van de spuit een deel van de afdruk af te schrapen in het borrelglas. Voor een middelgrote print is het meestal voldoende om een sectie van niet groter dan 1/5 van de totale print af te schrapen.
9. U zult een kleine merkbare verzameling sporen in het borrelglas hebben. Verwijder nu niet meer dan de helft van het water uit de spuit in het borrelglas en roer de sporen licht in de oplossing.
10. Zuig de sporenwateroplossing in de spuit. Het kan nodig zijn om wat meer water in het borrelglas te gieten en opnieuw te zuigen om alle sporen in de spuit te vangen.
11. Zodra u de sporenoplossing terug in de spuit heeft gebracht, moet u merken dat het water in de spuit licht getint is en dat u kleine groepjes sporen in de oplossing ziet drijven. Dit is goed, je hebt het proces voltooid.
12. Steriliseer de naald opnieuw met de met alcohol doordrenkte papieren handdoek, vervang de naaldbeschermer en plaats de spuit terug in uw schone zak met ritssluiting.
13. Laat de spuit niet minder dan 12 uur zitten voor gebruik in microscopie of inenting voor eetbare variëteiten. Hoe ouder de gebruikte print, hoe meer” uitgedroogd ” de sporen zullen worden. Voor een goede microscopie observatie of kieming, zullen de sporen moeten worden toegestaan om te rehydrateren.