Hyperchromicity

Warmtedenaturatie van DNA, ook wel smelten genoemd, zorgt ervoor dat de dubbele spiraalstructuur zich afwikkelt om enig vastgelopen DNA te vormen. Wanneer DNA in oplossing boven zijn smeltende temperatuur (gewoonlijk meer dan 80 °C) wordt verwarmd, wikkelt dubbelstrengs DNA zich af om enigstrengs DNA te vormen. De basen worden losgemaakt en kunnen zo meer licht absorberen. In hun inheemse staat, absorberen de basissen van DNA licht in het golflengtegebied van 260 nm. Wanneer de basen losraken, verandert de golflengte van maximale absorptie niet, maar neemt de geabsorbeerde hoeveelheid met 37% toe. Een dubbele strandde bundel van DNA die aan twee enige bundels scheiden veroorzaakt een scherpe coöperatieve overgang.

Hyperchromicity kan worden gebruikt om de conditie van DNA als temperatuurveranderingen te volgen. De overgang/smelttemperatuur (TM) is de temperatuur waarbij de absorptie van UV-licht tussen het maximum en het minimum 50% bedraagt, d.w.z. waarbij 50% van het DNA gedenatureerd is. Een tienvoudige verhoging van de concentratie monovalente kationen verhoogt de temperatuur met 16,6 °C.

het hyperchromische effect is de opvallende toename van de absorptie van DNA bij denaturatie. De twee bundels van DNA worden samen hoofdzakelijk door het stapelen interactie, waterstofbanden en hydrophobic effect tussen de complementaire basissen gebonden. De waterstofbinding beperkt de resonantie van de aromatische ring zodat de absorptie van het monster ook beperkt is. Wanneer de dubbele schroef van DNA met gedenatureerde agenten wordt behandeld, wordt de interactiekracht die de dubbele schroefstructuur houden verstoord. De dubbele schroef scheidt dan in twee enige bundels die in de willekeurige opgerolde bouw zijn. Op dit moment zal de base-base interactie worden verminderd, waardoor de UV-absorptie van DNA-oplossing wordt verhoogd omdat veel basen in vrije vorm zijn en geen waterstofbindingen met complementaire basen vormen. Dientengevolge, zal de absorptie voor single-stranded DNA 37% hoger zijn dan dat Voor double stranded DNA bij dezelfde concentratie.

Geef een antwoord

Het e-mailadres wordt niet gepubliceerd.