induceerbare clindamicineresistentie bij stafylokokken kan worden gedetecteerd door Disk diffusie methode met behulp van clindamycine en erytromycine schijven. D-test wordt uitgevoerd door disk diffusie, het plaatsen van een 15-µg Erythromycin schijf in de nabijheid van een 2-µg Clindamycin schijf op een agar plaat die is geïnoculeerd met een Staphylococcus isolaat; de plaat wordt dan ‘ s nachts uitgebroed.
Een afvlakking van de zone van remming rond de Clindamycin schijf proximaal van de Erythromycin schijf (het produceren van een zone van remming in de vorm van de letter ‘D’) wordt beschouwd als een positief resultaat en geeft aan dat Erythromycin heeft aangezet Clindamycin weerstand (een positieve “D-zone test”). Voor Erytromycine-resistente isolaten kunnen inductietesten laboratoria helpen bepalen of de resultaten voor clindamycine moeten worden gemeld als gevoelig (wanneer de inductietest negatief is) of als resistent (wanneer de inductietest positief is).
werkingsmechanisme van erytromycine en clindamycine en ontwikkeling van resistentie
erytromycine (een macrolide) en clindamycine (een lincosamide) vertegenwoordigen twee verschillende klassen antimicrobiële middelen die de eiwitsynthese remmen door binding aan de 50S ribosomale subeenheden van bacteriële cellen. Bij stafylokokken kan resistentie tegen beide antimicrobiële stoffen optreden door methylering van hun ribosomale doelplaats. Dergelijke resistentie wordt meestal gemedieerd door erm-genen.
klinische significantie van induceerbare clindamycine resistentie:
macrolide-lincosamide-streptogramine B (MLSB) resistentie, die wordt gemedieerd door target side modification mechanism, resulteert in resistentie tegen erytromycine, clindamycine en streptogramine B. Dit mechanisme kan constitutief zijn, waarbij de rRNA methylase altijd wordt aangemaakt, indien in vitro testen worden uitgevoerd, zijn Staphylococcus aureus-isolaten met constitutieve resistentie resistent tegen erytromycine en clindamycine.
klinische significantie van induceerbare Clindamycin resistentietest (D-Test)
Clindamycin is een aantrekkelijk middel voor empirische therapie voor vermoede S. aureusinfecties vanwege de uitstekende farmacokinetische en farmacodynamische eigenschappen. Klinisch falen van clindamycine therapie voor de behandeling van MRSA infecties zijn gedocumenteerd voor stammen die clindamycine gevoelig maar erythromycine resistent waren. De mislukkingen waren te wijten aan induceerbare resistentie tegen clindamycine.
in dergelijke gevallen kan in vivo therapie met clindamycine worden gekozen voor constitutieve erm mutanten, wat kan leiden tot klinisch falen. Clindamycine resistentie kan constitutief of induceerbaar zijn. Routinematige antibiotische gevoeligheidstesten kunnen deze stammen niet identificeren. De D-test (inducible clindamycin resistance) wordt gebruikt om inducible Clindamycin resistance te detecteren.
Procedure voor induceerbare clindamycine resistentie (D) Test:
- bereid 0.5 McFarland standaardsuspensie van erytromycine resistente Staphylococcus aureus isolaten
- maken een gazoncultuur van bacteriën in Muller Hinton Agar (MHA) platen.
- plaats clindamycine (2 µg ) en erytromycine (15 µg ) schijven met een tussenpoos van ongeveer 15 mm (gemeten van rand tot rand).incubeer de plaat gedurende 16 tot 18 uur bij 37oC
interpretatie van het resultaat van de D-Test
een duidelijke, D-vormige inhibitiezone rond de Clindamycin-schijf wordt aangeduid als het D-fenotype dat wordt aangeduid als D of D+. Vier andere niet-inductiefenotypen (aangeduid als negatief , wazige d-zone , resistent en gevoelig ) worden ook waargenomen in disk diffusieresultaten