InoculationEdit
de laboranten enten monster op bepaalde vaste agar platen met de streak plaat methode of in een vloeibaar kweekmedium, afhankelijk van wat het doel van de isolatie is:
- Als men wil isoleren alleen een bepaalde groep bacteriën, zoals Groep A Streptococcus van een keel wattenstaafje, men kan gebruik maken van een selectief medium dat zal het onderdrukken van de groei van het gelijktijdig bacteriën verwacht in de mix (door antibiotica aanwezig zijn in de agar-agar), zodat alleen Streptococcen zijn ‘geselecteerd’, d.w.z. zichtbaar opvallen. Om schimmels te isoleren, kan Sabouraud agar worden gebruikt. Als alternatief zijn dodelijke omstandigheden voor streptokokken en gramnegatieve bacteriën, zoals hoge zoutconcentraties in mannitol zoutagar, bevorderlijk voor de overleving van stafylokokken die aanwezig zijn in een monster van darmbacteriën, en fenolrood in de agar werkt als een ph-indicator die aangeeft of de bacteriën mannitol kunnen fermenteren door zuur in het medium uit te scheiden. In andere agar stoffen worden toegevoegd om het vermogen van een organisme om een zichtbaar pigment (bijv. granada medium voor groep B Streptococcus) die de kleur van de bacteriële kolonie verandert, of om bloedagar op te lossen door hemolyse zodat ze gemakkelijker kunnen worden Gespot. Sommige bacteriën zoals Legionellasoorten vereisen specifieke voedingsstoffen of toxinebinding zoals in houtskool om te groeien en daarom moeten media zoals gebufferde houtskool gistextractagar worden gebruikt.
- als men zoveel mogelijk of alle mogelijke stammen wil isoleren, moeten verschillende voedingsstoffen en verrijkte media, zoals bloedagar en chocoladeagar en anaerobe kweekmedia zoals thioglycolaatbouillon worden geïnoculeerd. Om de groei op te sommen, kunnen bacteriën worden gesuspendeerd in gesmolten agar voordat het vast wordt, en vervolgens worden gegoten in petrischalen, de zogenaamde ‘pour plate method’ die wordt gebruikt in de milieumicrobiologie en de voedselmicrobiologie (bv. zuiveltesten) om het zogenaamde ‘aërobe kiemgetal’vast te stellen.
Incubatiedit
nadat het monster in of op de gekozen media is ingeënt, worden zij geïncubeerd onder de juiste atmosferische omstandigheden, zoals aërobe, anaërobe of microaerofiele omstandigheden of met toegevoegde kooldioxide (5%), bij verschillende temperatuurstanden, bijvoorbeeld 37 °C in een incubator of in een koelkast voor koude verrijking, onder passend licht, bijvoorbeeld strikt zonder licht verpakt in papier of in een donker flesje voor scotochromogene mycobacteriën, en voor verschillende lengtes van de tijd, omdat verschillende bacteriën groeien met een verschillende snelheid, variërend van uren (Escherichia coli) tot weken (bijv. mycobacteriën).
met regelmatige, periodieke intervallen inspecteren laboratoriumtechnici en microbiologen de media op tekenen van zichtbare groei en registreren deze. De inspectie moet opnieuw plaatsvinden onder omstandigheden die de overleving van het isolaat bevorderen, dat wil zeggen in een “anaërobe kamer” voor bijvoorbeeld anaërobe bacteriën, en onder omstandigheden die de persoon die naar de platen kijkt niet bedreigen met een bijzonder infectieuze microbe, dat wil zeggen onder een biologische veiligheidskast voor Yersinia pestis (pest) of Bacillus anthracis (miltvuur) bijvoorbeeld.
Identificatiedit
wanneer bacteriën zichtbaar zijn gegroeid, zijn ze vaak nog gemengd. De identificatie van een microbe hangt van de isolatie van een individuele kolonie af, aangezien het biochemische testen van een microbe om zijn verschillende fysiologische kenmerken te bepalen van zuiver afhangt culture.To Maak een subcultuur, een Werkt opnieuw in aseptische techniek in de microbiologie, het opheffen van een enkele kolonie van het agar oppervlak met een lus en strepen het materiaal in de 4 kwadranten van een agar plaat of over als de kolonie enkelvoud was en niet gemengd leek.
Gram kleuring van het ruwe monster vóór incubatie of kleuring van vers gekweekt koloniemateriaal helpt om te bepalen of een kolonie bestaat uit gelijkmatig verschijnende bacteriën of gemengd is, en de kleur en vorm van bacteriën maken een eerste classificatie op basis van morfologie mogelijk. In de klinische microbiologie worden talrijke andere kleuringtechnieken voor bepaalde organismen gebruikt (zure snelle bacteriële vlek voor mycobacteriën). Immunologische kleuring technieken, zoals directe immunofluorescentie zijn ontwikkeld voor medisch belangrijke pathogenen die langzaam groeien (Auramine-rhodamine vlek voor mycobacteriën) of moeilijk te groeien (zoals Legionella pneumophila species) en waar het testresultaat zou veranderen standaard management en empirische therapie.
biochemisch testen van bacteriën omvat een set agars in flacons om motiel van niet-motiel te scheiden bacteria.In 1970 een geminiaturiseerde versie werd ontwikkeld, genaamd de analytische profiel index.
succesvolle identificatie via bijv. het genoom rangschikken en genomica hangt van zuivere culturen af.