VII.B routes geactiveerd door de Her2/neu Receptor
Receptor tyrosinekinase signalering wordt gemedieerd door een aantal SH2-bevattende substraten, waaronder fosfolipase C-γ (PLC-γ), PI-3-kinase, GTPaseactivating protein (GAP), Shc, Grb2, src familie kinasen, en Sh2 domein-bevattende fosfatasen. De activering van kinasesubstraten door receptortyrosinekinase leidt tot de versie van tweede boodschappers, zoals inositolfosfaat en diacylglycerol tussenpersonen. Bovendien leidt de activering van de RAS-route door receptortyrosinekinasen tot de regulatie van een serine/threonine-eiwitcascade, met inbegrip van de RAS-en de KAARTKINASEKINASE-route. Uiteindelijk, beïnvloedt de signaaltransductie de nucleaire transcriptie van genen of veroorzaakt eiwitwijzigingen, die de vooruitgang van de celcyclus en andere cellulaire activiteiten regelen. Een samenvatting van een aantal belangrijke signaaltransductiewegen betrokken bij transformatie gedreven door Her2/neu overexpressie wordt weergegeven in Fig. 4.
Fig. 4. Signaaltransductiewegen, geassocieerd met het Her2/neu oncogeen. Verschillende signaaltransductiewegen, waarvan wordt aangenomen dat ze bijdragen aan het transformatiepotentieel van Her2/neu, worden geïllustreerd.
Het is bekend dat tyrosinekinasesignalering meerdere routes activeert die groei, proliferatie en overleving beheersen. De relatieve bijdrage van elke weg is moeilijk om na te gaan en kan celtype specifiek zijn. De activering van de weg van het KAARTKINASE, echter, schijnt in vele situaties kritiek te zijn. We hebben in getransfecteerde cellen van verschillende types aangetoond dat het transformeren van niveaus van erbb-receptorcomplexen aanhoudende, niet-opgeloste activering van KAARTKINASE-activiteiten induceert. Leder en collega ‘ s hebben de Betekenis van verschillende signaaltransductiewegen onderzocht door het effect van pathway-specifieke farmacologische inhibitors op tumorlijnen te onderzoeken die uit transgene muismodellen worden vastgesteld. Tumorlijnen afgeleid van Neu transgene muizen toonden verhoogde activiteit in de kaart kinase pathway; voorts werd de groei van deze tumorlijnen geremd door een farmacologische inhibitor van de weg van het KAARTKINASE, terwijl borsttumorlijnen van verschillende oorsprong niet door deze agent werden beà nvloed. Deze gegevens suggereren dat Ras-activering van de MAP kinase-route een kritische component is van Her2/neu-geïnduceerde groei.
we hebben aangetoond dat het proteasoom een cruciale rol kan spelen bij de regulatie van celgroei en-transformatie bij HER2/neu-expressieve tumoren. NIH / 3T3 cellen getransformeerd door de overexpressie van p185neu werden behandeld met een monoklonaal antilichaam waarvan bekend is dat het leidt tot fenotypische reversie. Deze behandelde cellen werden vergeleken met onbehandelde cellen gebruikend differentiële mRNA vertoning, een onderzoekstechniek die mRNA species kan identificeren die in overvloed tussen twee steekproeven verschillen. TBP1, oorspronkelijk gekloond als een eiwit met een hoge homologie aan het HIV-Tat – bindende eiwit-1, toonde verhoogde mRNA-spiegels aan in met antilichamen behandelde cellen. Om de Betekenis van dit resultaat te testen, werd cDNA tbp1 gebruikt om getransfecteerde cellen. De uitdrukking tbp1 leidde tot omkering van het getransformeerde fenotype zoals gemeten door verminderde celproliferatie, verminderde kolonievorming in zachte agar, en remde zeer tumorvorming in athymic muizen. Dit identificeerde een regelgever van proteasome als hebbend een tumorontstorings-als activiteit. We verwachten dat downregulatie van proteasoomfuncties de afbraak van celcyclusremmers zal beperken, waardoor de celgroei wordt beperkt.in overeenstemming met het idee dat de regulering van de celcyclus van cruciaal belang is voor de transformerende capaciteit van Her2/neu, is cyclin D1 erkend voor zijn belang in Neu-transformatie. Lee en collega ‘ s merkten op dat de eiwitniveaus van cyclin D1 in zowel Neu transgene muismodellen als neu-getransformeerde cellijnen werden opgeheven. De inductie van Cyclin D1 zou door de verandering van kritieke residuen binnen Her2/neu kunnen worden ingetrokken. De transformatie werd getoond om in vivo door cyclin D1 antisense, een experimentele techniek worden geremd, die, theoretisch, specifiek de synthese van een doelproteã ne verhindert. Door het gebruik van dominant-negatieve en farmacologische inhibitors van de wegen van de celcyclus, werd bepaald dat de inductie van cyclin D1 door p185neu afhankelijk was van de Ras/kaart kinaseweg, maar niet op de Pi-3-kinaseweg. Deze experimenten versterken het belang van de weg van het KAARTKINASE en de kritische regulatie van de controle van de celcyclus door Her2/neu. Hoewel de weg van het KAARTKINASE om van groot belang voor het signaleren van erbB is getoond, kan de Betekenis van andere belangrijke signalerende wegen, zoals de weg van het PI-3-kinase, geenszins worden verdisconteerd. Een belangrijke stroomafwaartse effector van de Pi-3 – kinaseweg, waarvan het belang is geopenbaard, is de weg van het het overlevingskinaseweg van Akt. Als stroomafwaartse effector van vele signalen van de de groeifactor, verstrekt deze weg een antiapoptotic signaal. Mendelsohn en collega ‘ s toonden een beschermende rol aan voor EGF tegen FAS-geïnduceerde apoptose in zowel een borstkankercellijn als normale vereeuwigde menselijke epitheliale cellen. De bescherming die door EFG-stimulatie wordt geboden, blijkt afhankelijk te zijn van de akt-signalering. Liu en collega ‘ s toonden aan dat Hereguline, een ligand van de erbb-familie, leidt tot de activering van Akt, en bovendien dat AKT-activering wordt geblokkeerd door een remmend antilichaam tegen Her2, waardoor een rol voor Her2 in AKT-activering wordt onthuld. Wij hebben aangetoond dat het tumorontstoringsapparaat BRCA1 phosphorylated in reactie op activering ErbB2 is, en er is wat bewijsmateriaal dat deze wijziging ook door AKT het signaleren wordt beà nvloed.
dat erbB-signalering leidt tot overleving is niet verwonderlijk gezien de gegevens over de effecten van Her2/neu op chemosensitiviteit en radiosensitiviteit. Het is nu duidelijk dat een belangrijk aspect van het doden door zowel chemotherapeutische middelen als bestralingstherapie te wijten is aan de inductie van apoptose. Hoogwaardige glial maligniteiten zijn bijzonder ongevoelig voor standaard behandelingsstrategieën, en daarom zou elke methode die deze behandelingsstrategieën zou kunnen verbeteren van groot klinisch voordeel zijn. We hebben aangetoond dat glial en andere cellen getransformeerd door p185neu overexpressie fenotypisch kunnen worden teruggedraaid door de introductie van een P185 mutant met een intracellulaire truncatie net onder het membraan, p185T691Stop. Naast het veroorzaken van fenotypische reversie, p185t691stop-gemedieerde onbruikbaar maken van kinase signalerende gevoelige cellen aan apoptose veroorzaakt door γ-bestraling, een mediator van DNA-schade. Voorts werd deze apoptotische reactie getoond om p53 onafhankelijk te zijn, die vanuit een klinisch standpunt, gezien het hoge deel van menselijke tumors aanmoedigt waarvoor de overleving door verlies van p53-functie wordt verondersteld te worden verbeterd. Behandeling met monoklonale antilichamen tegen p185neu, zoals expressie van een afgeknotte p185, kan leiden tot fenotypische reversie en het uitschakelen van kinasereceptoren, en zal later worden besproken. Pietras en collega ’s toonden aan dat behandeling met zo’ n antilichaam leidt tot een afname van DNA-herstel, mogelijk als gevolg van een falen in de inductie van regulerende eiwitten zoals p21cip. Hoewel meerdere groepen hebben aangetoond dat het uitschakelen van kinasereceptoren de effectiviteit van antitumormiddelen kan verbeteren, blijft de overexpressie van Her2/neu een intrinsieke chemoresistentie bieden. Pegram en collega ‘ s onderzochten deze kwestie zowel in celcultuur als in muismodellen en vonden dat de overexpressie van Her2/neu alleen niet voldoende was om drugresistentie te verlenen en stelde voor dat Her2/neu kan schijnen om drugresistentie toe te schrijven aan snellere regrowth van tumors te verlenen. Collectief, echter, suggereren de studies van de rol van Her2/neu en apoptosis dat de overlevingsroutes een kritiek aspect van het signaleren van het receptortyrosinekinase zijn en dat deze component van het signaleren van het receptortyrosinekinase centraal staat om de mechanismen van transformatie en fenotypic reversie te begrijpen.