David a Weitz's Lab

kwantyfikacja cząsteczek wydzielanych przez komórki, np. cytokin, ma fundamentalne znaczenie dla charakterystyki odpowiedzi immunologicznej. Testy wychwytywania cytokin, które wykorzystują skonstruowane przeciwciała do zakotwiczenia wydzielanych cząsteczek w wydzielających się komórkach, są szeroko stosowane do scharakteryzowania odpowiedzi immunologicznych, ponieważ umożliwiają zarówno czułą identyfikację, jak i odzyskiwanie żywotnych komórek reagujących. Jeśli jednak cytokiny rozproszą się od wydzielających się komórek, komórki nie wydzielające będą również identyfikowane jako komórki reagujące. Tutaj zamykamy komórki odpornościowe w mikroprzepływowych kroplach i wykonujemy testy wychwytu cytokin w kroplach, aby ograniczyć dyfuzję wydzielanych cytokin. Używamy urządzeń mikroprzepływowych, aby szybko hermetyzować pojedyncze komórki NK-92 MI i ich docelowe komórki K562 w kropelki mikroprzepływowe. Wykonujemy testy przechwytywania IFN-γ w kroplach i wykazujemy, że komórki NK-92 mi rozpoznają komórki docelowe w kroplach i stają się aktywowane do wydzielania IFN-γ. Kapsułkowanie kropelek zapobiega dyfuzji wydzielanych produktów do sąsiednich komórek i znacznie zmniejsza zarówno fałszywie dodatnie, jak i fałszywie ujemne wyniki w porównaniu z testami wykonywanymi bez kropelek. W próbce zawierającej 1% prawdziwych pozytywów, enkapsulacja zmniejsza, z 94% do 2%, liczbę komórek prawdziwie pozytywnych pojawiających się jako negatywy; w próbce zawierającej 50% prawdziwych pozytywów, liczba komórek nie stymulowanych pojawiających się jako pozytywy zmniejsza się z 98% do 1%. Po uwolnieniu komórek z kropelek wydzielana cytokina zostaje wychwycona na wydzielające się komórki odpornościowe, umożliwiając FACS-izolację populacji wysoce wzbogaconych dla aktywowanych efektorowych komórek odpornościowych. Enkapsulacja kropli może być stosowana w celu zmniejszenia tła i poprawy wykrywania dowolnego testu wydzielania jednokomórkowego.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.