opis
Thermo Scientific odczynnik Pierce ’ a Ellmana (Dtnb) reaguje z grupami sulfhydrylowymi, uzyskując barwny produkt, zapewniając niezawodną metodę pomiaru zredukowanych cystein i innych wolnych sulfhydryli w roztworze.
odczynnik Ellmana (5,5′-ditio-bis-) służy do oszacowania grup sulfhydrylowych w próbce przez porównanie ze standardową krzywą związku zawierającego sulfhydryl, takiego jak cysteina. Alternatywnie, grupy sulfhydrylowe mogą być oznaczane przy użyciu współczynnika ekstynkcji TNB (14,150 M-1 cm-1 przy 412 nm). Odczynnik ellmana był używany do zastosowań innych niż estymacja sulfhydrylowa, takich jak oznaczanie alkilotioli za pomocą HPLC przy użyciu procedury derywatyzacji przed kolumną i do badania tioli w miejscu aktywnym kilku enzymów.
cechy odczynnika Ellmana:
• Test Sulfhydrylowy—reaguje ilościowo z wolnymi (zredukowanymi) grupami sulfhydrylowymi (—SH), uzyskując wykrywalny produkt TNB
• kolorowy produkt do wykrywania Kolorymetrycznego umożliwia pomiar spektrofotometryczny w kuwetach lub mikropłytkach (λmax = 412nm; ε = 14,150/M·cm)
• sprawdzona metoda—dobrze scharakteryzowana Chemia zapewnia oznaczanie peptydów lub białek grup sulfhydrylowych za pomocą obliczenia współczynnika ekstynkcji lub w porównaniu ze standardem cysteiny
właściwości odczynnika
• Alternatywne nazwy: Dtnb, odczynnik Ellmana
• Nazwa chemiczna: 5,5′-ditio-bis-(kwas 2-nitrobenzoesowy)
• reaktywny wobec: grup sulfhydrylowych (- SH)
• Wzór chemiczny: c14h8n2o8s2
• Numer CAS: 69-78-3
• Masa cząsteczkowa: 396,35
• postać: Żółty krystaliczny proszek
DTNB reaguje z wolną grupą sulfhydrylową, uzyskując mieszany disiarczek i kwas 2-nitro-5-tiobenzoesowy (TNB). Celem DTNB w tej reakcji jest sprzężona zasada (R-S -) wolnej grupy sulfhydrylowej. Dlatego szybkość tej reakcji zależy od kilku czynników: (1) ph reakcji, (2) pKa’ sulfhydrylu i (3) efekty steryczne i elektrostatyczne. TNB jest gatunkiem barwnym wytwarzanym w tej reakcji i ma wysoki współczynnik wymierania molowego w zakresie widzialnym. Molowy współczynnik ekstynkcji TNB został pierwotnie podany przez Ellmana (1959)na 13 600 M-1 cm-1 przy 412 nm i pH 8,0. W związku z tym wartość ta była często cytowana w literaturze. Późniejsze badania wykazały jednak, że molowy współczynnik ekstynkcji jest dokładniej odzwierciedlany przez wartość 14 150 M-1 cm-1 przy 412 nm. Na wyginięcie TNB nie wpływają zmiany pH pomiędzy 7,6 a 8,6. Jednak ekstynkcja TNB jest inna w innych rozpuszczalnikach.