indukcyjna oporność na klindamycynę w gronkowce można wykryć metodą dyfuzji dyskowej z użyciem dysków klindamycyny i erytromycyny. Test D przeprowadza się przez dyfuzję dyskową, umieszczając Dysk 15 µg erytromycyny w pobliżu dysku 2 µg klindamycyny na płytce agarowej, która została zaszczepiona izolatem gronkowcowym; następnie płytkę inkubuje się przez noc.
spłaszczenie strefy hamowania wokół dysku klindamycyny bliższej do tarczy klindamycyny.dysk erytromycyny (wytwarzający strefę hamowania w kształcie litery D) jest uważany za wynik pozytywny i wskazuje, że erytromycyna wywołała oporność na klindamycynę (pozytywny „test strefy d”). W przypadku izolatów opornych na erytromycynę, testy indukcyjne mogą pomóc laboratoriom w ustaleniu, czy wyniki klindamycyny powinny być zgłaszane jako wrażliwe (gdy test indukcyjny jest ujemny) czy jako oporne (gdy test indukcyjny jest dodatni).
mechanizm działania erytromycyny i klindamycyny oraz rozwój oporności
Erytromycyna (makrolid) i klindamycyna (linkozamid) reprezentują dwie odrębne klasy środków przeciwdrobnoustrojowych, które hamują syntezę białek poprzez wiązanie się z podjednostkami rybosomalnymi 50s komórek bakteryjnych. U gronkowców oporność na oba te środki przeciwdrobnoustrojowe może wystąpić poprzez metylację rybosomalnego miejsca docelowego. Taka oporność jest zazwyczaj pośredniczona przez geny erm.
znaczenie kliniczne indukowanej oporności na klindamycynę:
oporność na makrolid-linkozamid-streptogramin B (MLSB), w której pośredniczy mechanizm modyfikacji po stronie docelowej, powoduje oporność na erytromycynę, klindamycynę i streptograminę B. Mechanizm ten może być
- konstytutywny, gdzie metylaza rRNA jest zawsze wytwarzana,
jeśli wykonywane są badania in vitro Izolaty Staphylococcus aureus o oporności konstytutywnej są oporne na erytromycynę i klindamycynę. - lub może być indukowalna, gdzie metylaza jest wytwarzana tylko w obecności czynnika indukującego (Uwaga: erytromycyna jest skutecznym induktorem oporności na makrolid-linkozamid-streptogramin B (MLSB)). Izolaty o indukowanej oporności są oporne na erytromycynę, ale wydają się wrażliwe na klindamycynę w rutynowych testach invitro.
znaczenie kliniczne indukowanego badania oporności na klindamycynę (Test D)
klindamycyna jest atrakcyjnym środkiem do terapii empirycznej w przypadku podejrzenia zakażenia S. aureus ze względu na doskonałe właściwości farmakokinetyczne i farmakodynamiczne. Udokumentowano kliniczne niepowodzenia leczenia klindamycyną w leczeniu zakażeń MRSA dla szczepów wrażliwych na klindamycynę, ale opornych na erytromycynę. Niepowodzenia były spowodowane indukcyjną opornością na klindamycynę.
w takich przypadkach, terapia klindamycyną in vivo może wybrać konstytutywne mutanty erm, co może prowadzić do niepowodzenia klinicznego. Oporność na klindamycynę może być konstytutywna lub induktywna. Rutynowe testy wrażliwości na antybiotyki nie są w stanie zidentyfikować tych szczepów. Test d (inducible clindamycin resistance) stosuje się do wykrywania indukowanej oporności klindamycyny.
procedura badania indukcyjnej oporności na klindamycynę (D):
- przygotuj 0.5 McFarland standardowa zawiesina szczepów Staphylococcus aureus opornych na erytromycynę
- tworzy hodowlę bakterii w płytkach Muller Hinton Agar (MHA).
- umieścić klindamycynę (2-µg ) i erytromycynę (15-µg ) w odległości około 15 mm od siebie (mierzone od krawędzi do krawędzi).
- inkubować płytkę przez 16 do 18 godzin w temperaturze 37oC
interpretacja wyniku testu D
wyraźna, w kształcie litery D strefa hamowania wokół dysku klindamycyny jest oznaczona jako fenotyp D, który jest oznaczony jako D lub D+. Cztery inne fenotypy niewprowadzające (oznaczone jako ujemne, mgliste strefy D, oporne i podatne) są również obserwowane w wynikach dyfuzji dysku