Inokulacjaedit
technicy laboratoryjni zaszczepiają próbkę na pewne stałe płytki agarowe metodą smugową lub do ciekłego podłoża hodowlanego, w zależności od celu izolacji:
- jeśli chce się wyizolować tylko określoną grupę bakterii, takich jak paciorkowce grupy A z wymazu z gardła, można użyć pożywki selektywnej, która hamuje wzrost współistniejących bakterii spodziewanych w mieszance (przez antybiotyki obecne w agarze)., tak, że tylko paciorkowce są „wybrane”, tzn. wyraźnie wyróżniają się. Aby wyizolować grzyby, można użyć agaru Sabouraud. Alternatywnie, śmiertelne warunki dla paciorkowców i bakterii gram-ujemnych, takie jak wysokie stężenia soli w agarze solnym mannitolu, sprzyjają przetrwaniu gronkowców obecnych w próbce bakterii jelitowych, a czerwień fenolowa w agarze działa jako wskaźnik ph pokazujący, czy bakterie są w stanie fermentować mannitol przez wydalanie kwasu do pożywki. W innych agarach dodaje się substancje w celu wykorzystania zdolności organizmu do wytwarzania widocznego pigmentu (np. pożywka dla Streptococcus grupy B), która zmienia kolor Kolonii bakteryjnej, lub rozpuszcza agar krwi poprzez hemolizę, dzięki czemu można je łatwiej dostrzec. Niektóre bakterie, takie jak gatunki Legionella, wymagają szczególnych składników odżywczych lub wiązania toksyn, jak w węglu drzewnym, aby rosnąć, a zatem należy stosować media, takie jak buforowany węgiel drożdżowy, ekstrakt z agaru.
- jeśli chcemy wyizolować jak najwięcej lub wszystkie możliwe szczepy, należy zaszczepić różne pożywki, jak również pożywki wzbogacone, takie jak agar z krwi i agar czekoladowy oraz pożywki beztlenowe, takie jak bulion tioglikolanowy. Aby wyliczyć wzrost, bakterie można zawiesić w roztopionym agarze, zanim stanie się stały, a następnie wlać do szalek Petriego, tak zwaną „metodą nalewania płytki”, która jest stosowana w mikrobiologii środowiskowej i Mikrobiologii żywności (np. testowanie nabiału) w celu ustalenia tak zwanej „tlenowej liczby płytek”.
Inkubacjaedytuj
po zaszczepieniu próbki do lub na wybrane media, są one inkubowane w odpowiednich warunkach atmosferycznych, takich jak warunki tlenowe, beztlenowe lub mikroaerofilowe lub z dodatkiem dwutlenku węgla (5%), w różnych ustawieniach temperatury, na przykład 37 °C w inkubatorze lub w lodówce do wzbogacania na zimno, w odpowiednim świetle, na przykład ściśle bez światła owiniętego w papier lub w ciemnej butelce dla mykobakterii scotochromogenu i dla różnych długości prątków. czasu, ponieważ różne bakterie rosną z różną prędkością, różną od godzin (Escherichia coli) do tygodni (np. mycobacteria).
w regularnych odstępach czasu technicy laboratoryjni i mikrobiolodzy sprawdzają media pod kątem widocznych oznak wzrostu i rejestrują je. Ponowna kontrola musi odbywać się w warunkach sprzyjających przetrwaniu izolatu, tj. w „komorze beztlenowej” na przykład dla bakterii beztlenowych oraz w warunkach, które nie zagrażają osobie patrzącej na płytki zakażeniu szczególnie zakaźnym drobnoustrojem, tj. w szafce bezpieczeństwa biologicznego na przykład dla Yersinia pestis (plaga) lub Bacillus anthracis (wąglik).
IdentificationEdit
Kiedy bakterie wyraźnie rosną, często są nadal mieszane. Identyfikacja drobnoustrojów zależy od izolacji pojedynczej Kolonii, ponieważ biochemiczne badanie drobnoustrojów w celu określenia jego różnych cech fizjologicznych zależy od czystego culture.To zrób subkulturę, JEDEN ponownie działa w technice aseptycznej w mikrobiologii, podnosząc pojedynczą kolonię z powierzchni agaru za pomocą pętli i smugi materiału do 4 ćwiartek płyty agarowej lub całego, jeśli Kolonia była pojedyncza i nie wyglądała na mieszaną.
barwienie gramowe surowej próbki przed inkubacją lub barwieniem świeżo wyhodowanego materiału Kolonii pomaga określić, czy Kolonia składa się z jednolicie pojawiających się bakterii lub jest mieszana, a kolor i kształt bakterii pozwalają na pierwszą klasyfikację w oparciu o morfologię. W mikrobiologii klinicznej stosuje się wiele innych technik barwienia dla poszczególnych organizmów (acid fast bacterial stain for mycobacteria). Immunologiczne techniki barwienia, takie jak bezpośrednia Immunofluorescencja, zostały opracowane dla ważnych medycznie patogenów, które wolno rosną (plama auraminowo-rodaminowa dla prątków) lub są trudne do wzrostu (takie jak gatunki Legionella pneumophila) i gdzie wynik testu zmieniłby standardowe postępowanie i terapię empiryczną.
badanie biochemiczne bakterii polega na zestawie agarów w fiolkach, aby oddzielić ruchliwość od nieruchomości bacteria.In 1970 opracowano zminiaturyzowaną wersję o nazwie analytical profile index.
udana identyfikacja poprzez np. sekwencjonowanie genomu i genomika zależy od czystych kultur.