Przegląd: dzięki tej metodzie zamierzamy stworzyć czystą i wolną od zanieczyszczeń strzykawkę wypełnioną zarodnikiem. Strzykawka zostanie napełniona podgrzewaną i sterylizowaną wodą i pozostawiona do ostygnięcia. Zarodniki zostaną następnie przeniesione z odcisku zarodnika do roztworu strzykawki za pomocą oczyszczonego i zdezynfekowanego kieliszka. Po zakończeniu tego Tek stworzysz strzykawkę z roztworem zarodników gotową do użycia w dowolnym zastosowaniu mikroskopowym.
Uwaga: Te instrukcje są najbardziej skuteczne, gdy są wykonywane w najbardziej sterylnym dostępnym środowisku. Preferowana metoda polega na wykonaniu poniższych czynności podczas pracy w czystym i sterylnym schowku lub przed laminarnym okapem przepływowym. Jeśli nie chcesz konstruować schowka lub go nie masz, poniższe kroki zostały wykonane z sukcesem, pracując na dokładnie oczyszczonym i zdezynfekowanym blacie. Do czyszczenia i dezynfekcji obszaru roboczego zaleca się stosowanie środka dezynfekującego w sprayu i rozcieńczonego roztworu wybielacza.
potrzebne materiały:
puste sterylne strzykawki
Dwa kwarty (lub większe) garnek do gotowania
jedna butelka 91% alkoholu izopropylowego
kilka ręczników papierowych
płomień zapalniczki lub alkoholu
kieliszek do strzał
sterylny Wydruk zarodników
procedura pierwsza: wykonanie sterylnej strzykawki
1. Napełnij garnek do gotowania w połowie wodą z kranu lub wodą destylowaną (użyj wody destylowanej, jeśli woda z kranu zawiera wyższe poziomy minerałów i chemikaliów).
2. Gotuj wodę w garnku na wysokości przez co najmniej dziesięć minut, powinno to być wystarczające do sterylizacji i oczyszczenia wody ze wszystkich bakterii, wirusów i zarodników pleśni.
3. Weź pustą strzykawkę i napełnij ją wrzącą wodą. Pozostawić na dwie minuty z gorącą wodą w środku. (Jeśli strzykawka była zapakowana w sterylność, pomiń kroki 4 i 5).
4. Przepłukać gorącą wodę ze strzykawki do zlewu, a nie z powrotem do rondla.
5. Powtórz kroki 3 i 4 jeszcze dwa razy. Po drugim czasie pozostawić gorącą wodę w strzykawce.
6. Umieścić strzykawkę w chłodnym miejscu wolnym od przeciągów, najlepiej w czystym worku z zamkiem błyskawicznym
7. Pozostawić do ostygnięcia na kilka godzin przed przystąpieniem do procedury drugiej.
procedura druga: Przenoszenie zarodników do strzykawki
1. Najpierw wyczyść obszar roboczy. Może to obejmować wycieranie wszystkich powierzchni roboczych rozcieńczonym roztworem wybielacza i obficie natryskiwanie obszaru środkiem dezynfekującym, takim jak lizol.
2. Umieść następujące materiały w schowku lub na oczyszczonej i oczyszczonej powierzchni roboczej: kieliszek, schłodzone strzykawki, butelkę z alkoholem, ręcznik papierowy, nadruk (nadal w torebce z zamkiem błyskawicznym) i płomień zapalniczki lub alkoholu.
3. Umyć ręce mydłem antybakteryjnym przed przejściem dalej.
4. Złóż ręcznik papierowy na ¼ sekcji i namocz róg z alkoholem.
5. Z nasączonym alkoholem ręcznikiem wytrzyj wnętrze kieliszka, zasadniczo sterylizując powierzchnię, której zamierzasz użyć w przeniesieniu. Pozostawić kieliszek do wyschnięcia na powietrzu, powinno zająć tylko kilka sekund.
6. Zdjąć osłonę igły ze sterylnej strzykawki i wysterylizować igłę płomieniem. Następnie weź nasączony alkoholem ręcznik papierowy i wytrzyj igłę, aby jeszcze bardziej pomóc w sterylizacji. Należy unikać kontaktu igły z jakąkolwiek inną powierzchnią, chyba że poinstruowano inaczej.
7.Uwaga: ważne jest, aby w tym momencie pracować tak szybko, jak to możliwe, aby pomóc zwalczyć ryzyko zanieczyszczenia pleśni i bakterii wpadających do obszaru roboczego, a tym samym rujnując strzykawkę.
8. Usuń odcisk z torby do przechowywania. Rozłóż go, aby odsłonić zarodniki. Lekko zacząć zeskrobać, za pomocą igły strzykawki, część odcisku off do kieliszka. W przypadku druku średniej wielkości zwykle wystarcza zeskrobanie sekcji nie większej niż 1/5 całego wydruku.
9. Będziesz miał małą zauważalną kolekcję zarodników w kieliszku. Teraz usunąć nie więcej niż połowę wody ze strzykawki do kieliszka, lekko mieszając zarodniki w roztworze.
10. Wyssać roztwór wodny zarodników do strzykawki. Może być konieczne usunięcie większej ilości wody do kieliszka i ponowne ssanie, aby pomóc w wychwyceniu wszystkich zarodników do strzykawki.
11. Gdy roztwór zarodników zostanie ponownie umieszczony w strzykawce, należy zauważyć, że woda w środku jest lekko zabarwiona i mogą pojawić się małe skupiska zarodników unoszące się w roztworze. To dobrze, zakończyłeś proces.
12. Ponownie wysterylizować igłę papierowym ręcznikiem nasączonym alkoholem, założyć osłonę igły i włożyć strzykawkę z powrotem do czystej torby z zamkiem błyskawicznym.
13. Pozostawić strzykawkę na nie mniej niż 12 godzin przed użyciem w mikroskopii lub szczepieniem odmian jadalnych. Im starszy nadruk, tym bardziej „odwodnione” będą zarodniki. Dla właściwej obserwacji mikroskopowej lub kiełkowania, zarodniki będą musiały być dopuszczone do nawodnienia.