wprowadzenie
ko-immunoprecypitacja, co-IP w skrócie, jest szeroko stosowaną techniką identyfikacji fizjologicznie istotnych interakcji białko-białko poprzez wykorzystanie przeciwciał specyficznych dla białka docelowego do pośredniego wychwytu białek, które są związane z tym specyficznym białkiem docelowym. Jako rozszerzenie IP, Co-IP może przechwytywać i oczyszczać nie tylko główny cel, ale także inne makrocząsteczki wiążące się z celem przez natywne interakcje. Różnica między IP i co-IP jest przedmiotem eksperymentu. IP koncentruje się na głównym celu, który wiąże przeciwciało. Podczas gdy Co-IP celuje w drugorzędowe cele, które oddziałują z białkami pierwotnymi, zamiast przeciwciała. Po immunoprecypitacji białka uwięzione na kulkach są myte i eluowane, aby uzyskać oczyszczone pierwotne i wtórne białka docelowe. Te docelowe białka mogą być scharakteryzowane w różnych metodach, takich jak WesternBlot i Mass Spec analysis w ramach strategii shotgun, w celu identyfikacji identyfikatorów białka partnerskiego, powinowactwa wiązania, kinetyki wiązania i nieodkrytych funkcji białka pierwotnego.
czynniki krytyczne o Co-IP:
jako potężna technika, Co-IP jest regularnie wykorzystywany przez biochemików do badania interakcji białko–białko. Podczas gdy metodologia Co-IP jest prosta, identyfikacja fizjologicznych interakcji białko-białko poprzez reakcję co-IP nie jest łatwa, ze względu na niestabilność interakcji, niespecyficzne wiązanie z odczynnikami IP i zanieczyszczenie przeciwciałami. Wszystkie powyższe problemy mogą mieć negatywny wpływ na wykrywanie interakcji białko-białko.
Co-IP kompleksów białkowych
ponieważ Co-IP zależy od interakcji białko-białko w celu wykrycia związanych białek, powinowactwo wiązania i stabilność oddziaływań fizjologicznych podczas całego procesu Co-IP jest bardzo ważna. Nieodpowiedni czas wiązania i rozległe etapy mycia mogą zmniejszyć skuteczność wiązania i spowodować niepowodzenie w wykrywaniu interakcji z białkami. W związku z tym, dla białek, które mają tygodniowe powinowactwo wiązania lub dynamiczne interakcje, konieczna jest wcześniejsza stabilizacja interakcji białko-białko, na przykład procesy sieciowania mogą być wykonywane przed Co-IP.
niespecyficzne interakcje
pęknięcie błony komórkowej i organelli powoduje uwolnienie dużej ilości białek, które są oddzielone granicą, aby wejść w kontakt. Dlatego nieuniknione jest występowanie niespecyficznych interakcji, innymi słowy fałszywie pozytywnych interakcji, które zakłócają analizę danych. Jest to szczególnie powszechne w przypadku białek, które mają rozwinięte lub elastyczne regiony, które są stosunkowo lepkie i niespecyficznie wiążą inne białka. Sposoby ponownego przeżywania takich problemów mogą być wstępne oczyszczanie lizatu za pomocą pierwotnych przeciwciał w celu usunięcia niespecyficznych białek i zmiana siły jonowej buforu w celu zmniejszenia niespecyficznego wiązania.
Creative Proteomics może zapewnić niestandardowy projekt eksperymentalny i udoskonalić parametry co-IP w oparciu o potrzeby klientów. Obiecujemy niezawodną analizę Co-IP interakcji białko-białko z naszymi doświadczonymi naukowcami i technikami.
cechy usługi Co-IP:
- badanie interakcji między białkami a kompleksem białkowym
- monitorowanie dynamiki interakcji białka
- badanie interakcji białko-białko w stanie niemalże fizjologicznym
- mapowanie oddziałujących domen białek
nasza usługa Co-IP zawiera:
- projektowanie eksperymentów w oparciu o specyficzne potrzeby projektu: bufory, koraliki, przeciwciała, itp.
- optymalizacja parametrów, takich jak czas wiązania
- liza komórek, IP, mycie& elucja
- WesternBlot/spektrometria mas, w zależności od potrzeb projektu
- analiza danych& dostarczenie raportu
procedura zamawiania:
