zona pellucida jest acelularną powłoką, która otacza błonę osocza w pełni wyhodowanych oocytów ssaków który pełni wiele ważnych funkcji podczas oogenezy, zapłodnienia i rozwoju przedimplantacyjnego. W tym badaniu zidentyfikowano i scharakteryzowano białka zona pellucida mysiego oocytu za pomocą zonae pellucidae wyizolowanych pojedynczo z w pełni wyrośniętych oocytów za pomocą mikropipetów operowanych ustami. W celu oceny czystości izolowanych zonae pellucidae zastosowano różne kryteria morfologiczne i biochemiczne, a w większości przypadków stwierdzono, że są one praktycznie wolne od zanieczyszczenia innymi białkami oocytów. Ustalono, że każda zona pellucida zawiera 4.8 ng białka, co stanowi 80% lub więcej suchej masy zona pellucida i około 17% całkowitego białka oocytu. Analizy elektroforetyczne zaledwie pięciu izolowanych zonae pellucidae leczonych diazotyzowanym kwasem jodosulfanilowym wykazały obecność tylko trzech białek znakowanych radioizotopem, oznaczonych ZP1, ZP2 i ZP3. Te same trzy białka zidentyfikowano przez niebieskie zabarwienie Coomassie ’ ego, gdy dużą liczbę izolowanych zonae pellucidae (około 750) poddano elektroforezie w żelu poliakrylamidowym SDS. Te trzy białka migrują jako szerokie pasma na żelach poliakryloamidowych SDS, zgodnie z ich glikoproteinami, o pozornej masie cząsteczkowej 200 000 (ZP1), 120 000 (ZP2) i 83 000 (ZP3). Te same białka znakowano radioizotopem, gdy nienaruszone oocyty traktowano diazotyzowanym kwasem jodosulfanilowym, odczynnikiem, który nie przenika przez błonę osocza oocytu, lub gdy izolowane zonae pellucidae traktowano znakowanym 3H chlorkiem 1-dimetyloaminonaftaleno-5-sulfonylu. Wyniki analizy aminokwasów i dwuwymiarowej elektroforezy o wysokiej rozdzielczości poszczególnych białek sugerują, że każde białko reprezentuje unikalny łańcuch polipeptydowy. Białka ZP1, ZP2 i ZP3 stanowią odpowiednio około 36, 47 i 17% całkowitego białka zona pellucida. W obecności środków redukujących, które powodują rozpuszczanie zona pellucida, ZP1 przekształca się w gatunek, który migruje z pozorną masą cząsteczkową 130 000, co sugeruje, że istnieje jako oligomer, stabilizowany wiązaniami dwusiarczkowymi, w stanie niewykształconym. Wyniki tych eksperymentów omówiono pod kątem właściwości zona pellucida przed i po zapłodnieniu oraz porównano z wynikami uzyskanymi przy użyciu kopert witellinowych jaj z gatunków zwierząt niemammalijskich.