Introduction
La co-immunoprécipitation, Co-IP en bref, est une technique largement appliquée pour identifier les interactions protéine-protéine physiologiquement pertinentes en utilisant des anticorps spécifiques à la protéine cible pour capturer indirectement des protéines qui sont liées à cette protéine cible spécifique. En tant qu’extension de l’IP, la Co-IP peut capturer et purifier non seulement la cible principale, mais également d’autres macromolécules se liant à la cible par des interactions natives. La différence entre IP et co-IP est au centre de l’expérience. L’IP se concentre sur la cible principale, qui lie l’anticorps. Alors que le Co-IP cible les cibles secondaires, qui interagissent avec les protéines primaires, au lieu des anticorps. Après immunoprécipitation, les protéines piégées sur les billes sont lavées et éluées pour obtenir des protéines cibles primaires et secondaires purifiées. Ces protéines cibles peuvent être caractérisées par diverses méthodes, telles que l’analyse des taches occidentales et des spécifications de masse dans le cadre de la stratégie shotgun, pour identifier les identifiants de protéines partenaires, les affinités de liaison, la cinétique de liaison et les fonctions non découvertes de la protéine primaire.
Facteurs critiques sur la Co-IP:
En tant que technique puissante, la Co-IP est utilisée régulièrement par les biochimistes pour explorer les interactions protéine–protéine. Bien que la méthodologie Co-IP soit simple, l’identification des interactions physiologiques protéine-protéine par réaction Co-IP n’est pas facile, en raison de l’instabilité de l’interaction, de la liaison non spécifique aux réactifs IP et de la contamination par les anticorps. Tous les problèmes ci-dessus peuvent avoir des effets négatifs sur la détection des interactions protéine-protéine.
Co-IP des complexes protéiques
Comme la Co-IP dépend des interactions protéine-protéine pour détecter les protéines liées, l’affinité de liaison et la stabilité des interactions physiologiques pendant tout le processus de Co-IP sont très importantes. Un temps de liaison insuffisant et des étapes de lavage étendues peuvent réduire l’efficacité de liaison et entraîner un échec de la détection de l’interaction des protéines. Par conséquent, pour les protéines, dont on prévoit qu’elles ont une affinité de liaison hebdomadaire ou des interactions dynamiques, une stabilisation préalable des interactions protéine-protéine est nécessaire, par exemple, des processus de réticulation peuvent être effectués avant la Co-IP.
Interactions non spécifiques
La rupture de la membrane cellulaire et des organites provoque la libération d’une grande quantité de protéines, qui sont séparées par la frontière, pour entrer en contact. Par conséquent, il est inévitable que des interactions non spécifiques, en d’autres termes, des interactions faussement positives, puissent se produire, ce qui interfère avec l’analyse des données. Ceci est particulièrement fréquent pour les protéines qui ont des régions dépliées ou flexibles, qui sont relativement collantes et qui se lient de manière non spécifique à d’autres protéines. Les moyens de revivre de tels problèmes peuvent être le précontrôle du lysat en utilisant des anticorps primaires pour éliminer les protéines non spécifiques et la modification de la force ionique du tampon pour réduire la liaison non spécifique.
Creative Proteomics peut fournir une conception expérimentale personnalisée et affiner les paramètres de Co-IP en fonction des besoins des clients. Nous promettons une analyse Co-IP fiable des interactions protéine-protéine avec nos scientifiques et techniciens expérimentés.
Caractéristiques du service Co-IP:
- Étudier les interactions entre protéines et complexe protéique
- Surveiller la dynamique de l’interaction protéique
- Étudier l’interaction protéine-protéine dans un état non dénaturant, qui est presque physiologique
- Cartographier les domaines d’interaction des protéines
Notre service Co-IP contient:
- Conception d’expériences basée sur les besoins spécifiques de votre projet: tampons, billes, anticorps, etc.
- Optimisation des paramètres, tels que le temps de liaison
- Lyse cellulaire, IP, lavage &élution
- WesternBlot / spectrométrie de masse, en fonction des besoins du projet
- Analyse des données &livraison du rapport
Procédure de commande:
