Aperçu: Avec cette méthode, nous allons créer une seringue remplie de spores propre et sans contaminants. La seringue sera remplie d’eau chauffée et stérilisée et laissée refroidir. Les spores seront ensuite transférées de l’empreinte de spores dans la solution de seringue à l’aide d’un verre à liqueur nettoyé et désinfecté. À la fin de ce Tek, vous aurez créé une seringue de solution de spores prête à l’emploi dans n’importe quelle application de microscopie.
REMARQUE: Ces instructions sont plus efficaces lorsqu’elles sont exécutées dans l’environnement le plus stérile disponible. La méthode préférée consiste à suivre les étapes ci-dessous tout en travaillant dans une boîte à gants propre et stérile ou devant une hotte à flux laminaire. Si vous ne souhaitez pas construire de boîte à gants, ou si vous n’en avez pas, les étapes suivantes ont été effectuées avec succès en travaillant sur un comptoir soigneusement nettoyé et désinfecté. Il est recommandé d’utiliser un désinfectant en aérosol et une solution d’eau de Javel diluée pour nettoyer et désinfecter la zone de travail.
Matériaux nécessaires:
Seringues stériles vides
Marmite de deux pintes (ou plus)
Une bouteille d’alcool isopropylique à 91%
Plusieurs serviettes en papier
Une flamme plus légère ou alcoolisée
Un verre à liqueur
Impression de spores stériles
Première procédure: Fabrication d’une seringue stérile
1. Remplissez votre marmite à mi-chemin avec de l’eau du robinet ou de l’eau distillée (utilisez de l’eau distillée si votre eau du robinet contient des niveaux plus élevés de minéraux et de produits chimiques).
2. Faire bouillir l’eau dans la casserole à haute température pendant au moins dix minutes, cela devrait être suffisant pour stériliser et nettoyer l’eau de toutes les bactéries, virus et spores de moisissures.
3. Prenez votre seringue vide et remplissez-la d’eau bouillante. Laissez-le reposer pendant deux minutes avec l’eau chaude à l’intérieur. (Si votre seringue était empaquetée de stérilité, sautez les étapes 4 et 5).
4. Purgez l’eau chaude de la seringue dans un évier et non dans la casserole.
5. Répétez les étapes 3 et 4 deux fois de plus. La deuxième fois, laissez l’eau chaude dans la seringue.
6. Placez la seringue dans un endroit frais et exempt de courant d’air, de préférence dans un sac propre à fermeture à glissière
7. Laissez-le refroidir pendant plusieurs heures avant de passer à la deuxième procédure.
Procédure Deux: Transfert des spores d’impression dans une seringue
1. Nettoyez d’abord votre zone de travail. Cela peut impliquer d’essuyer toutes les surfaces de travail avec une solution d’eau de Javel diluée et de pulvériser généreusement la zone avec un désinfectant tel que le Lysol.
2. Placez les matériaux suivants dans votre boîte à gants ou sur la surface de travail nettoyée et sanatisée: Le verre à liqueur, vos seringues refroidies, la bouteille d’alcool, une serviette en papier, votre empreinte (toujours dans un sac à fermeture éclair) et la flamme du briquet ou de l’alcool.
3. Lavez-vous les mains avec un savon antibactérien avant de continuer.
4. Pliez la serviette en papier en ¼ de section et imbibez un coin de celle-ci avec de l’alcool.
5. Avec la serviette imbibée d’alcool, essuyez l’intérieur du verre à liqueur, en stérilisant essentiellement la surface que vous êtes sur le point d’utiliser dans le transfert. Laissez le verre à liqueur sécher à l’air libre, cela ne devrait prendre que quelques secondes.
6. Retirez le protège-aiguille de votre seringue stérile et stérilisez l’aiguille à la flamme. Ensuite, prenez votre serviette en papier imbibée d’alcool et essuyez l’aiguille pour faciliter davantage la stérilisation. Essayez d’éviter de laisser l’aiguille toucher toute autre surface, sauf instruction contraire.
7.REMARQUE: il est important à ce stade de travailler le plus rapidement possible pour aider à lutter contre les risques de contamination des moisissures et des bactéries tombant dans votre zone de travail et ruinant ainsi votre seringue.
8. Retirez l’impression de son sac de rangement. Dépliez-le pour exposer les spores. Commencez légèrement à gratter, à l’aide de l’aiguille de la seringue, une section de l’empreinte dans le verre à liqueur. Pour une impression de taille moyenne, il est généralement suffisant de gratter une section ne dépassant pas 1/5 de l’impression totale.
9. Vous aurez une petite collection notable de spores dans le verre à liqueur. Maintenant, n’éliminez pas plus de la moitié de l’eau de la seringue dans le verre à liqueur, en remuant légèrement les spores dans la solution.
10. Aspirez la solution d’eau de spores dans la seringue. Vous devrez peut-être évacuer un peu plus d’eau dans le verre à liqueur et aspirer à nouveau pour aider à capturer toutes les spores dans la seringue.
11. Une fois que vous avez la solution de spores dans la seringue, vous devriez remarquer que l’eau à l’intérieur est devenue légèrement teintée et que vous pouvez voir de petites grappes de spores flotter dans la solution. C’est bien, vous avez terminé le processus.
12. Stérilisez à nouveau l’aiguille avec une serviette en papier imbibée d’alcool, remplacez le protège-aiguille et replacez la seringue dans votre sac à fermeture à glissière propre.
13. Laissez la seringue reposer pendant au moins 12 heures avant de l’utiliser en application en microscopie ou en inoculation pour les variétés comestibles. Plus l’impression utilisée est ancienne, plus les spores deviendront « déshydratées ». Pour une bonne observation au microscope ou une bonne germination, il faudra laisser les spores se réhydrater.