med má antifungální účinek proti druhu Candida

Abstrakt

výskyt infekcí Candida se celosvětově stupňuje. Závažnost těchto infekcí je umocněna zvyšující se úrovní rezistence na léky. Uvádíme, že některé medy mají významnou antifungální aktivitu proti klinickým izolátům druhů Candida. Důležité je, že minimální inhibiční koncentrace těchto medů by byla dosažitelná v klinickém prostředí.

Úvod

Med byl používán jako lék po tisíce let, a bylo zjištěno, že být účinné antimikrobiální činidlo 1. Tato antimikrobiální aktivita pramení především z produkce peroxidu vodíku z glukózy a kyslíku glukózooxidázou, enzym 2 odvozený od včel. Med z některých druhů Leptospermum flora původem z Austrálie a Nového Zélandu obsahuje další fytochemické složky, které dále zvyšují jeho antibakteriální aktivitu 3. Přesná povaha těchto složek je ještě třeba určit.

ačkoli několik studií in vitro prokázalo antibakteriální vlastnosti medu 3-5, jen málo z nich zkoumalo účinek proti houbám. Výskyt plísňových infekcí se zvyšuje jak v komunitním, tak v nemocničním prostředí, s Candida spp. mezi přední organismy. Candida albicans způsobuje orální infekce, více než 50% případů kandidémie 6-9 a více než 90% vaginální kandidózy 10, 11. V poslední době se v klinických studiích vyskytly zvýšené zprávy o druzích jiných než C.albicans Candida. Candida glabrata se stala dominantní non-c. druhy albicans Candida zapojené do krevních a vaginálních infekcí 9, 12-14, zatímco Candida dubliniensis se často podílí na orofaryngeální kandidóze 15. Infekce jinými druhy než C. albicans Candida má důležité klinické důsledky, protože mnoho z nich je rezistentních na konvenční antifungální terapii na bázi triazolu. Jiné konvenční antifungální terapie jsou buď toxické, nebo mají omezenou účinnost a roste potřeba nových silných antimykotik. Cílem současné studie bylo stanovit účinnost různých medů proti klinickým izolátům C. albicans, C. glabrata A C. dubliniensis.

Materiály a metody

Klinických izolátů C. albicans, C. glabrata a C. dubliniensis byly testovány na čtyřech různých medů: nezpracované Jarrah zlato s peroxidem vodíku činnost (celkem antibakteriální aktivitu (jak je popsáno v 16) ekvivalent na 30,2% fenol 17); Medihoney® Antibakteriální Med Bariéru, patentovanou směs Leptospermum a peroxidu vodíku medů (fytochemických činnost ≥18% fenolu rovnocenná); Comvita® Péče o Ránu, 18+, čistý Leptospermum zlato (fytochemických činnost ≥18% fenolu rovnocenná); a umělý med, který se používá k simulaci vysoké hladiny cukru v medu se nachází (7,5 g sacharózy, 37,5 g maltózy, 167.5 g glukózy, a 202.5 g fruktózy v 85 ml sterilní vody).

minimální inhibiční koncentrace (MIC) každého medu byla stanovena na základě mikrodiluční metody 18 NCCLS. Padesát procent (w/v) zásobní roztok medu v RPMI-1640 médiu (s glutaminem a bez bikarbonátu sodného (Sigma)) byly připraveny bezprostředně před každý test a sterilizovaný filtrací přes pórů 0,2 µm filtrů (Millipore). Zásobní roztoky byly dále ředěny RPMI-1640 médiu v 96jamkové mikrotitrační desky dát poslední zlato koncentracích, které vzrostly v 1% (w/v) krocích. Suspenze izolátů Candida byly připraveny ve sterilním 0,85% fyziologickém roztoku a propustnost při 530 nm byla upravena na 80-88%. Suspenze byly naředěny v RPMI-1640 médiu, a 25 µl bylo přidáno do každé jamky mikrotitrační desky ihned po přípravu medu řešení, což v konečném inokula 0.5–2.5×103 cfu/ml. Po inkubaci při teplotě 35oc za 24 h, MIC byl zaznamenán jako nejnižší koncentrace medu, která brání viditelnému růstu. Každý izolát Candida byl testován ve dvou vyhotoveních a testy byly opakovány v samostatný den. Mann-Whitney U test byl použit k vyhodnocení statisticky významných skupin. Korelace byly provedeny pomocí testu hodnosti Spearmana.

výsledky

výsledky citlivosti C. albicans, C. glabrata A C. dubliniensis na různé medy jsou uvedeny v tabulce 1. Med Jarrah byl výrazně aktivnější proti třem druhům Candida (P < 0.00001). Antifungální aktivity květinové medy byly výrazně větší než umělý med proti C. albicans a C. glabrata (P < 0.002), ale pro C. dubliniensis, pouze Jarrah med byl významně aktivnější (P < 0.00001). C. dubliniensis byla více náchylné k osmotický účinek všech medů, a k antimykotické účinky Jarrah zlato, vykazují výrazně nižší Mic než jiné druhy (P < 0.00001). C. glabrata, která je přirozeně méně citlivá na mnoho konvenčních antimykotik 19, byla nejméně citlivá na testované medy (p < 0.00001).

profily rezistence na léčivo byly k dispozici pro 20 izolátů. Dvanáct z nich bylo buď rezistentních, nebo citlivých na dávce závislých na itrakonazolu a/nebo flukonazolu. Všechny tyto izoláty byly inhibovány medem, bez statistického vztahu mezi antimykotickou citlivostí a citlivostí na med (p > 0,05).

Diskuse

Limitovaná pozorování našli zlato mají inhibiční účinek proti C. albicans v vitro20–22, nicméně žádná z těchto studií používá standardizované medů nebo analytické metody. Pouze jedna publikovaná studie použila med se známou aktivitou ekvivalentní fenolu ke zkoumání antifungální aktivity 23. V této studii byly účinky pastevního medu porovnávány s medem Leptospermum proti houbám dermatofytů. V souladu s výsledky současné studie bylo zjištěno, že med typu peroxidu vodíku má větší antifungální účinek.

současná studie nezjistila žádný statistický vztah mezi antifungální citlivostí a citlivostí na med. To je důležité zejména s ohledem na zvyšující se výskyt rezistence na azoly drog mezi izoláty Candida 8, 24, 25, a zjištění, že azolových na bázi profylaxe zvyšuje riziko infekce s non-C. druhy albicansCandida, které mohou být méně citlivé na obvyklé dávky léku 6, 24.

ačkoli tato studie prokazuje antifungální účinek medu in vitro, existují některé praktické úvahy pro jeho použití in vivo. Za prvé, med je omezen na lokální léčbu a nemohl být použit k léčbě kandidémie, nejzávažnější formy kandidózy. Nicméně, jako hlavní rizikový faktor pro infekce krevního řečiště je kolonizace nebo infekce z externí webové stránky, jako jsou permanentní katetry, nebo ústní nebo vaginální sliznice 19, zlato mohou být použity profylakticky, aby se zabránilo více závažných infekcí. Bylo zjištěno, že celý med umístěný přímo kolem katétrů je přinejmenším stejně účinný jako povidon jod 26 nebo mupirocin 27 při prevenci infekce v místě výstupu. Za druhé, protože med je rozpustný ve vodě, může být zředěn nebo odstraněn tělními tekutinami, zejména slinami v ústní dutině. Pilotní studie English et al. 28 zjištěno významné snížení plaku skóre a místa krvácení u pacientů, kteří dostávali žvýkací med kůže‘; tato stejná technika může být použita k léčbě ústní kandidózy. Na jiných místech těla by pravidelná aplikace 100% medu udržovala koncentraci výrazně nad požadovaným MIC. Med by mohl být také začleněn do Pesaru pro léčbu vaginální kandidózy. Dalším praktickým problémem je přítomnost katalázy v tělních tekutinách, která má potenciál snížit aktivitu peroxidu vodíku. Kazuistiky a klinické studie však naznačují, že je zachována dostatečná aktivita, aby byl med účinný v klinickém prostředí 29, 30. Výsledky současné studie tvrdí, že kontrolované klinické studie stanovily med jako topické antifungální činidlo.

poděkování

tato práce byla podpořena grantem Výboru pro výzkum a vývoj společnosti Rural Industries Honeybee Committee číslo us-128. Klinické izoláty byly laskavě poskytnuty Westmead Hospital Institute of Clinical Pathology and Medical Research, Sydney, Austrálie; a Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Írán. Vzorky medu byly laskavě poskytnuty společností Medihoney Pty. Ltd., Queensland, Austrálie; Comvita Medical Ltd., Te zvracet, Nový Zéland; a západní australská asociace včelařů.