beskrivelse
Thermo Scientific Pierce Ellmans reagens (dtnb) reagerer med sulfhydrylgrupper for at give et farvet produkt, hvilket giver en pålidelig metode til måling af reducerede cysteiner og andre frie sulfhydryl i opløsning.
Ellmans reagens (5,5 ‘ – dithio-bis -) bruges til at estimere sulfhydrylgrupper i en prøve ved at sammenligne med en standardkurve for en sulfhydrylholdig forbindelse, såsom cystein. Alternativt kan sulfhydrylgrupper analyseres ved hjælp af udryddelseskoefficienten for TNB (14.150 M-1 cm-1 ved 412 nm). Ellmans reagens er blevet anvendt til andre anvendelser end sulfhydrylestimering, såsom til bestemmelse af alkylthioler ved hjælp af HPLC ved hjælp af en præ-søjlederivatiseringsprocedure og til at studere thioler på det aktive sted for flere forskellige stoffer.
egenskaber ved Ellmans reagens:
• Sulfhydrylassay-reagerer kvantitativt med frie (reducerede) sulfhydrylgrupper (- SH) for at give detekterbart TNB-produkt• br> * kolorimetrisk detekteringsfarvet produkt muliggør spektrofotometrisk måling i kuvetter eller mikroplader (lhmaks = 412nm; 14.150/M·cm)
• gennemprøvet metode—velkarakteriseret kemi giver kvantificering af peptid-eller proteinsulfhydrylgrupper ved hjælp af udryddelseskoefficientberegning eller ved sammenligning med en Cysteinstandard
Reagensegenskaber
• Alternative navne: Dtnb, Ellmans reagens
• Kemisk navn: 5,5′-dithio-bis-(2-nitrobenssyre)
• reaktiv mod: sulfhydrylgrupper (—SH)
• kemisk formel: c14h8n2o8s2
• CAS-nummer: 69-78-3
• molekylvægt: 396,35
• form: Gult krystallinsk pulver
dtnb reagerer med en fri sulfhydrylgruppe for at give et blandet disulfid og 2-nitro-5-thiobenssyre (TNB). Målet for DTNB i denne reaktion er den konjugerede base (R—S-) af en fri sulfhydrylgruppe. Derfor er hastigheden af denne reaktion afhængig af flere faktorer: (1) reaktionens pH, (2) PKA’ af sulfhydryl og (3) steriske og elektrostatiske virkninger. TNB er den farvede art, der produceres i denne reaktion og har en høj molær udryddelseskoefficient i det synlige område. Den molære udryddelseskoefficient for TNB blev oprindeligt rapporteret af Ellman (1959) til at være 13.600 M-1 cm-1 ved 412 nm og pH 8,0. Derfor er denne værdi ofte citeret i litteraturen. Senere undersøgelser har imidlertid vist, at den molære udryddelseskoefficient afspejles mere nøjagtigt med en værdi på 14.150 M-1 cm-1 ved 412 nm. Udryddelsen af TNB påvirkes ikke af ændringer i pH mellem 7, 6 og 8, 6. Udryddelsen af TNB er imidlertid forskellig i andre opløsningsmidler.