eksperimentel og terapeutisk medicin

introduktion

Bronchial astma er en kronisk inflammatorisk luftvejsygdom, der involverer mange inflammatoriske celler og mediatorer. T-celler, især T-hjælper (Th) 1 og Th2. har en afgørende rolle iinduktion af luftvejsinflammation hos astmatiske patienter (1). Komplicerede immunresponser er i stand til at inducere Th1-mangel og Th2-hyperaktivitet, hvilket resulterer i en Th1/Th2-ubalance. Denne ubalance fremmer immunoglobulin (Ig)Esekretion og sensibiliserer mastocyt og eosinofiler via ændret cytokinsekretion og forårsager allergisk inflammation og luftvejshyperrespons (2,3).Interferon (IFN) – kurr og interleukin (IL) -4 er typiske cytokiner af henholdsvis th1 og Th2.

hos patienter med astma initieres vedvarende luftvejbetændelse af antigenpræsenterende celler (APC), somintegrerer forskellige allergener i et signal for T-celler og primerer de efterfølgende immunresponser (4,5).Aktivering af T-celler kræver signaler, der initieres via TCR-komplekset og cluster of differentiation (CD)28. Modne dendriticceller (MDC ‘ er) udtrykker høje niveauer af de co-stimulerende molekylercd80 og CD86, som giver det signal, der kræves fortriggering T-celleaktivering, ekspansion og differentiering viainteraktion med CD28 (6). Tidligere undersøgelser har vist, at CD80-og CD86-niveauer er forhøjede indlagte patienter med astma (7,8).

i tidligere undersøgelser,der undersøgte astmatiske modeller, har MDC ‘ er vist sig at inducere Th2-polarisering, opregulere IL-4-sekretion, nedregulere IFN-kur-produktion og inducere eosinofilbetændelse (9,10). Undersøgelser, der undersøger virkningerne af nedskydningen af CD80 og CD86 i DC ‘ er på differentiering af og cytokinsekretion af T-hjælperceller iurinmodeller af astma mangler.

i den foreliggende undersøgelse blev co-stimulerende t-cellaktiveringssignaler blokeret af undertrykkelsen af CD80 og Cd86molekylekspression på DCs ved anvendelse af lille interfererende RNA (siRNA), og virkningerne af CD80 og CD86-nedslag på ekspressionsniveauerne af Th1/Th2 typiske cytokiner IFN-Larsen og IL-4 blev evalueret. Således blev potentialet for CD80 og CD86 som mål for anvendelse afrna-interferens (RNAi) i den terapeutiske målretning af astma undersøgt.

materialer og metoder

Dyr

i alt 20 sunde specifikke patogenfrie gradeBALB / C-mus (6-8 uger; gennemsnitsvægt, 18 g 2 g) blev købt fracentret for forsøgsdyr fra Sun Yat-Sen University (Guangjou, Kina). Eksperimenter blev udført ifølgeprotokoller godkendt af Animal Studies Committee of Sun Yat-SenUniversity.

Astmamodeller

i alt 20 mus blev tilfældigt tildelt togrupper: i) den astmatiske gruppe og ii) den normale kontrol group.In den astmatiske gruppe, hver mus blev sensibiliseret over for ovalbumin (OVA; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) intraperitonealt på dage1, 14 og 21 med 100 liter æg, der blev emulgeret i 20 mg alun(Chemical Reagent Co., Kina). Derefter blev musene udsat for en aerosoludfordring på 5% æg i 30min/dag i lufttætte beholdere (med dimensioner på 50 liter 50 liter 50 cm) på dage 28-34. I den normale kontrolgruppe blev mus sensibiliseret og udfordret som ovenfor med en ækvivalent mængde saltopløsning i stedet for ÆGPROTEINOPLØSNINGEN. Ved 24 timer efter den sidsteudfordring blev mus ofret af en godkendt cervikal dislokationsprocedure udført af faglært og fuldt uddannet personale. Thelungs blev fjernet og derefter fikseret i 10% ethanol i 24 timer.prøver blev dehydreret, indlejret i paraffin og farvet medhematoksylin og eosin som tidligere beskrevet (11). Patologiske ændringer i bronchial oglungevæv blev vurderet under et Nikon Eclipse Ti lightmicroscope (Nikon Corporation, Tokyo, Japan).

adskillelse af knoglemarv-derivedDCs

alle mus blev ofret ved cervikal dislokation 24 timer efter den sidste udfordring. Knoglemarven blev skyllet fra thefemurs og tibiae med rpmi-1640 dyrkningsmedium (Gibco; ThermoFisher Scientific, Inc., MA, USA). Efter centrifugering ved 250 liter g i 5 minutter blev cellerne behandlet med rødblodcellelysebuffer (RBC)., Ltd., Beijing,Kina), vasket med fosfatbufret saltvand (PBS), centrifugeret ved 250 liter gfor 5 min og dyrket i RPMI-1640 suppleret med recombinantmouse granulocyt makrofag koloni-stimulerende faktor (rmGM-CSF;Peprotech, Inc., Rocky Hill, NJ, USA; 10 ng/ml) og rmIL-4(Peprotech; 10 ng/ml) blev brugt igen. Efter 6 dages kultur blev 1 liter/ml lipopolysaccharid (LPS; Sigma-Aldrich) tilsat, og derefter blev der høstet ikke-klæbende MDC ‘ er på dag 7. DC ‘ er blev farvet ved 4 liter Cfor 30 minutter med fluoresceinisothiocyanat (FITC)-konjugeret hamster anti-CD11c (5 liter/ml; 11-0114), phycoerythrin (PE)-konjugeret hamster anti-CD80 (5 liter/ml; 12-0801), FITC-konjugeretrat anti-CD86 (5 liter/ml; 11-0862) og PE-konjugeret rotte anti-CD80 majorhistokompatibilitetskompleks (MHC) II (5 liter/ml; 12-5322; allebioscience, Inc., San Diego, CA, USA) monoklonale antistoffer, ogblev efterfølgende analyseret ved strømningscytometri (BD FACSVerse; BDBiosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) for at bestemmepositiv ekspressionshastighed for det mærkede antigenekspression.

siRNA og transfektion

de specifikke siRNA-sekvenser (tabel i) rettet mod CD80 og CD86 blev designet og udvalgt efter metoderne i Gu et al(12). Alle siRNA blev købt frashanghai GenePharma Co., Ltd. (Shanghai, Kina). Transfektionstep blev udført i henhold til producentens protokol forLipofectamine 2000 (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.).Kort sagt blev Dc ‘ er dyrket i en 24-brønds vævskulturplade med en densitet på 1 liter 105 celler/brønd dagen før transfektion. TilForbered lipid-siRNA-komplekser, blev 3 Lip-Lipofectamin 2000inkuberet i 50 Lip-Opti-MEM (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.)ved stuetemperatur i 5 minutter, og 12 liter af det angivne siRNA vari øjeblikket kombineret med 50 liter Opti-MEM. Det fortyndede lipofectamin 2000 og siRNA blev efterfølgende blandet og inkuberet i yderligere 20 minutter ved stuetemperatur til kompleksdannelse.Derefter blev komplekset inkuberet med DCs i en 24-brøndplade ved 37 liter C i en 5% befugtet CO2 i luftatmosfære i 6 timer. når cotransfektion blev udført, ækvivalente mængder afcd80 siRNA:Lipofectamine 2000 og CD86 siRNA:Lipofectamine 2000komplekser blev tilsat til hver brønd. FAM-scrambled-siRNA blev brugt somDen negative kontrol for at bestemme transfektionseffektiviteten. Der blev oprettet tre grupper af transficerede DC ‘er: i non-siRNA-gruppen blev kun Lipofectamine 2000 tilsat, uden at der blev tilføjet nogen Irna til DC’ erne. I siRNA – gruppen blev MDC ‘ erne overført af CD80-og CD86-specifik siRNA. I negativesiRNA-gruppen blev MDC ‘er transficeret af ikke-specifik ikke-targetingFAM-siRNA, som ikke har nogen homologi med de målrettede RNA’ er.Eksperimenter blev udført i tre eksemplarer for hver prøve.Transfektionseffektivitet blev bestemt ved anvendelse af fluorescensmikroskopi (Nikon Eclipse Ti, Nikon Corporation) og detekteret afstrømningscytometri.

revers transkription-kvantitativpolymerasekædereaktion (RT-kpcr)

for at evaluere cd80-og CD86-mRNA-ekspressionsniveauerefter transfektion blev RT-kpcr udført. Primersekvenser (tabel II) blev designet i overensstemmelse med GenBank og syntetiseret af DaAn Gene Co., Ltd. af Sun Yat-SenUniversity (Kina). Ved 24 timer efter transfektion blev totalRNA på 1 liter 106 DCs ekstraheret ved hjælp af Trisol reagens (Invitrogen;Thermo Fisher Scientific, Inc.) og omvendt transskriberet og amplificeret ved hjælp af SYBR Green RT-PCR kit (Chiagen GmbH,Hilden, Tyskland) i en Roche LightCycler 480 (Roche Diagnostics,Basel, Danmark). Forstærkningerne blev udført i henhold til producentens protokol for kvantiteten SYBR Green RT-PCRkit (Takala, Japan). Amplifikationsbetingelserne var 40 cyklusser af93 liter C i 3 minutter, 93 liter C i 30 sekunder, 55 liter C i 45 sekunder og 72 liter C i 45 sek. hver prøve blev administreret til hver af tre brønde. Relativegene expression levels were calculated using the quantificationcycle (Cq) method with normalization to glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase (GAPDH) as the reference gene using 2−∆∆Cq(13).

Strømningscytometri

for at detektere de positive ekspressionshastigheder for CD80 ogcd86 på DCs efter transfektion blev strømningscytometri udført på MHC II/CD11c-porten til CD80 og CD86. Seks timerefter transfektion blev Dc ‘ er vasket to gange med PBS og inkuberet med fluorescerende mærket antistof ved 4 kg C i 30 minutter.Derefter blev cellerne vasket igen med PBS og fikseret med10 g/l paraformaldehyd. Følgende monoklonalantistoffer mod mus blev anvendt: PE-anti-MHC II, FITC-Anti-CD11c, PE-anti-CD80 og FITC-anti-CD86, som nævnt ovenfor. Alle strømningscytometriske analyser blev udført under anvendelse af IgG-isotypiske kontroller.

t-celleseparation

Milter blev fjernet, efter at musene var blevet aflivet ved cervikal dislokation. T-celler blev adskilt ved hjælp af muselymfocytseparationsmedium ifølge producentens protocol (Dakevi Biotech Co., Ltd., Kina). Celletætheden blev justeret til 1 liter 109/l inden yderligere behandling.

blandet lymfocytreaktion(MLR)

den astmatiske murine knoglemarvsafledte DCs (1-tir 104/brønd) og sunde T-celler (1-tir 105/brønd) blev co-dyrket I96-brøndplader i et forhold på 1:10. Samkultursystemerne blev opdelt i tre grupper: i) ikke-siRNA-gruppen, ii) siRNA-gruppen, andiii) den negative siRNA-gruppe med DCs fra de tilsvarende grupper som beskrevet ovenfor. Derefter blev æg tilsat til hver brønd til afinal koncentration på 10 mg/l i et samlet volumen på 200 liter. Cellerne blev inkuberet ved 37 liter C i en 5% befugtet CO2-luftatmosfære i 72 timer.

immunosorbentassays(ELISAs)

efter 3 dages samkultur blev supernatanten indsamlet. IFN-karrus og IL-4 niveauer blev analyseret ved hjælp af ELISA kitsspecifik for IFN-karrus og IL-4 (Dakvi Biotech Co., Ltd.) i henhold til producentens anvisninger. Absorbansværdier blev læst ved 450 Nm ved hjælp af en Multiskan MK3 (Thermo Fisher Scientific, Inc.).

statistisk analyse

statistiske analyser blev udført med Spsssoft, version 13.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA). Data er repræsenteret som den gennemsnitlige standardafvigelse (SD). Undersøgelser varudført i tre eksemplarer for hver mus. Statistiske sammenligninger mellem grupper blev udført ved hjælp af envejsanalyse af varians,og sammenligninger inden for en gruppe blev udført ved hjælp af Student ‘ St-test. Forskelle mellem grupper blev betragtet som statistiskbetydelig, når P<0.05.

resultater

astmatisk model

de 20 sunde SPF-grade BALB / C-mus blev tildelttil astmatiske og normale kontrolgrupper med 10 mus i hver. Allmice blev evalueret i sidste ende uden eksperimenteltdyretab. Ifølge lungevævspatologien, lungesektionerfra de ÆGIMMUNISEREDE mus viste klar luftvejsinflammation medperibronchiolære og perivaskulære infiltrater. Disse infiltrater bestod overvejende af eosinofiler og lymfocytter, ogsektioner viste bronkial slimhinde og glat muskelfortykning,øget slimudskillelse, udslip af luftvejsepitelceller, luftvejstenose og inflammatoriske celler spredt i lungeinterstitium. Ingen signifikante patologiske ændringer blev observeret ilungesektioner fra den normale kontrolgruppe. Repræsentativhistopatologiske data er vist i Fig.1.

celleoverflademolekylekspression ved hjælp af DCS

ekspressionsniveauerne af CD11c, CD80 og CD86 på demdc-overflader blev detekteret ved fluorescensaktiveret cellesortering(FACS). MDC ‘ er fra den astmatiske gruppe udtrykte CD11c på et niveausammenlignet med det i den normale kontrolgruppe; der blev ikke fundet nogen signifikant forskel mellem de to grupper (P>0,05). I sammenligning med den normale kontrolgruppe er den astmatiske gruppeviste imidlertid signifikant højere cd80-og CD86-ekspressionsniveauer(P<0,05; Fig. 2).

transfektion af mDCs

de CD80 – og CD86-specifikke siRNA-konstruktioner blev med succes overført til mDCs. De transficerede MDC ‘ er varobserveret under et fluorescensmikroskop 6 timer efter transfektion.Transfektionseffektiviteten af siRNA detekteret af FACS var ~75% (Fig. 3).

mRNA og proteinekspression af Cd80 og CD86 af MDC ‘er efter transfektion

mRNA-og proteinekspressionsniveauerne af CD80 ogcd86 i de transficerede MDC’ er blev påvist ved RT-kpcr og Facsanalyse ved henholdsvis 24 og 72 timer efter transfektion. Den CD80and CD86 mRNA udtryk niveauer konstateret ved RT-qPCR angivet thatCD80 mRNA udtryk niveauer i den ikke-siRNA, siRNA og negativesiRNA grupper var 2.09±0.46, på 0,60±0.17, og 2.04±0.93,henholdsvis, og CD86 mRNA udtryk niveauer var 3.58±0.20,0.91±0.48, og 2.83±0.83, hhv. De data, som leveres af FACSindicated, at CD80 protein positive udtryk priser i thenon-siRNA, siRNA og negative siRNA grupper var 82.45±15.80,30.79±7.07 og 81.83±10.07%, henholdsvis, og CD86 proteinpositive udtryk priser var 89.45±10.22, 27.29±6.99, and87.66±11.Henholdsvis 74%. MRNA-ekspressionsniveauet og proteinpositive ekspressionshastigheder udviste sammenlignelige resultater. Der var ingen signifikant betydning mellem den ikke-siRNA-gruppe og dennegative siRNA-gruppe (P>0,05). Cd80-og CD86-ekspression ved demrna og proteinniveauer i siRNA-gruppen faldt signifikant sammenlignet med det i ikke-siRNA-og negative siRNA-grupper(P<0,05; Fig. 4 og 5). Dette viser, at siRNA-målrettet indgriben i væsentlig grad kan undertrykke CD80-og CD86-mRNA-ogproteinekspressionsniveauer.

IFN-larr og IL-4-sekretion af T-cellerko-dyrket med MDC ‘ er

efter 72 timers samkultur blev IFN-Karr-og IL-4-niveauer i supernatanten af MDC-og T-celle-samkultursystemet detekteret af ELISA. IFN-Kerr-ekspression blev signifikant øget i siRNA-gruppen (132,73-25,04-pg/ml) sammenlignet med den ikke-siRNA-og negative siRNA-grupper (henholdsvis 72,56-26,30-og 80,21-24,42-pg/ml; P<0,05), mens der ikke blev påvist nogen signifikante forskelle mellem de ikke-siRNA-og negative siRNA-grupper(p>0.05). IL-4-ekspressionsniveauerne blev signifikant reduceret i siRNA-gruppen (93,04 liter 23,13 pg/ml) sammenlignet med de ikke-siRNA-og negative siRNA-grupper (henholdsvis 150,69 liter 29,50 og 163,19 liter 25,36 pg/ml; P<0,05), mens der ikke blev påvist nogen signifikante forskelle mellem de ikke-siRNA-og negative siRNA-grupper(p>0.05; fig. 6).

Diskussion

Bronchial astma er en kronisk inflammatorisk luftvejsygdom, der involverer en række inflammatoriske celler, herunder mastceller, eosinofiler, lymfocytter og andre cellekomponenter (14-17).Th1 / Th2 ubalance er en nøglefaktor, der bidrager til astma sværhedsgrad(18). APC ‘er,herunder DC’ er, makrofager og B-celler (19), spiller en afgørende rolle i stimuleringen af T-celler (3). Blandt dem er DC den mest magtfuldeapc, der bidrager til primære og sekundære immunresponser,herunder allergisk immunitet. Modne DCs (mDCs) med høje niveauer afekspression af de co-stimulerende molekyler CD80 og CD86 kanaktivere T-celler, mens umodne dendritiske celler (iDCs) med et lavt ekspressionsniveau af CD80 og CD86 undertrykker t-celleresponsenog inducerer immuntolerance (20,21). Dcsin patienter med astma har vist sig at være hyperaktive (22).

CD80 og CD86 er to typer proteiner, der udtrykkes på APC-overfladen, og som arbejder i tandem for at give økostimulerende signaler, der er nødvendige for T-celleaktivering ogoverlevelse. Tidligere undersøgelser har vist, at ekspressionsniveauerne af co-stimulerende molekyler CD80 og CD86 på MDC-overfladen er tæt forbundet med Th2-cellereaktion og luftvejsinflammation(23,24). Hos astmatiske patienter, MDC ‘ er dethøjt udtrykker CD80 og CD86 kan stimulere na-kurstv CD4+hjælper t-celleaktivering for at differentiere mod Th2-celler,hvilket resulterer i en Th1/Th2 ubalance. Derefter forårsager den utilstrækkelige udskillelse af Th1-cytokiner, såsom IFN-kur sammen med den øgedesekretion af Th2-cytokiner, såsom IL-4 og IL-5, eosinofil inflammation og allergisk luftvejsinflammation(10,24,25). Der kræves tosignaler til fremme af Th2-celleaktivering(26-28). Det første signal er dannelsen afantigen-MHC-komplekser på MDC-overfladen, der binder specifikt med T-cellereceptor-CD3-receptorkomplekset på T-celleoverflader,og det andet signal er costimulerende molekylekspression ogfunktionel aktivering på MDC-overfladerne, der specifikt binder tilreceptorer på Na-kurstceller; de to signaler danner en co-stimulatorvej (29). Det er også blevet foreslået, at der er et tredje signal (30), da visse cellulære molekyler produceret af DCs, såsom thymisk stromal lymfopoietin (TSLP), påvirker retningen af TH-celledifferentiering. Men blandt allenævntesignaler er CD80 / CD86-CD28 co-stimulerende stier den mest klassiske og vigtige. Tidligere forskning har indikeretat CD80/CD86-CD28 co-stimulerende vej kan være et effektivt mål for astmabehandling ved at demonstrere, at blokering af cd80 / CD86 co-stimulerende vej ved monoklonale antistoftilgangekan hæmme betændelse hos astmatiske mus (25). Derudover kan undertrykkelse af CD80 / CD86co-stimulerende vej ved anvendelse af antisense oligonukleotider undertrykke luftvejshyperaktivitet (31).

RNAi er et genhæmmende fænomen, hvorbyendogene eller eksogene specifikke dobbeltstrengede RNA ‘ er udløser nedbrydning af homolog mRNA og inducerer tab af tilsvarende funktionelle fænotyper. Siden teknikken først blev opdaget i 1998 af Fire et al (32), har teknikken gennemgået en videreudvikling for at opnå en høj grad af specificitet og effektivitet. Den terapeutiske anvendelse af RNAitechnology er et emne, der har tiltrukket høje niveauer afinteresse i grundlæggende medicinsk og klinisk forskning i de senere år.RNAi ‘ s evne til at hæmme virulent genekspression har væretbredt anvendt til behandling af en række sygdomme (33-35).En række undersøgelser har også rapporteret, at RNAi kan bruges inDCs til at diagnosticere og behandle bronchial astma (36-39).Darcan-Nicolaisen et al (40) opdagede, at de to vigtigste tegn på allergisk astma Iova-induceret astma musemodel, som er luftvejsinflammation oghyperaktivitet, blev signifikant forbedret ved signaltransducer og aktivator af transkription 6 (STAT6) lyddæmpning i luftvejspitelceller ved anvendelse af administration af siRNA næsedråber.(41) viste, at siRNA-medieret suppressor af cytokinsignalering 3(SOCS3) genhæmning kunne undertrykke luftvejsreaktivitet ogeosinofil infiltration, der blev induceret af allergenisk stimulering hos astmatiske mus. (42) fandt, at anvendelsen af siRNA var i stand til at hæmme tyrosinproteinkinase (TPK) genekspression i DCs af astmatiske mus, undertrykker den funktionelle evne til DCS som antigenpræsenterende celler og derved hæmmer T-cellaktivering og differentiering. Undersøgelser vedrørende virkningerne af siRNA-medieret CD80-og CD86-nedslag i DCs på T-celledifferentiering hos astmatiske mus mangler imidlertid. I den foreliggende undersøgelse blev CD80-og CD86 – mRNA ‘ er og proteinekspression i murine Knoglemal-afledte DCs med succes reduceret med CD80-ogcd86-målretning siRNA, som verificerede effektiviteten af RNAi.

i denne undersøgelse blev der anvendt en astmatisk musemodel, der blev etableret efter tidligere rapporterede metoder(43). Resultaterne viste, at MDC ‘ erne opnået fra den astmatiske gruppe udviste øgede cd80-og CD86-ekspressionsniveauer, hvilket indebærer, at CD80/Cd86-kapaciteten kan øges hos astmatiske patienter. Efter overførsel af MDC ‘ erne med CD80 – og CD86-målrettet siRNA blev de RNA-ekspressionsniveauer og proteinpositive ekspressionshastigheder forcd80 og CD86 signifikant reduceret, hvilket bekræftede den hæmmende virkning, som siRNA-tilgangen havde på co-stimulatormolekylerne CD80 og CD86 på transkriptions-og translationsniveau. I supernatanten fra co-kulturen af MDC ‘er og T-celler inducerede RNAi en stigning i IFN-kur-ekspression og en reduktion afil-4-niveauer,hvilket indikerer, at nedsættelse af ekspressionen af de økostimulerende molekyler CD80 og CD86 i MDC’ er svækkede cd80/CD86-CD28 co-stimulerende vej i astmatiske mus. RNAi påvirkede også ekspressionen af Th1 / Th2 cytokiner, hvilket indikerer detoriginal Th1 / Th2 ubalance blev ændret, og følgelig blev immuntolerance induceret. Disse fund indikerer, at CD80 og Cd86kan være potentielle mål for RNAi-anvendelse i astmabehandling og give en ny vej til genterapi af astma.

anerkendelser

denne undersøgelse blev støttet af et åbent projekt tilskud fra State Key Laboratory of Respiratory Disease (Guangjou,Kina) (grant no. 2007da80154f1107).

rospan=”1″colspan= “1”>: Øget ekspression af plasma-og celleoverfladekostimulerende molekyler CTLA-4, CD28 og CD86 hos voksne patienter med allergisk astma. Clin Immunol. 141:122–129. 2005.Se artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI

ropspan=”1″ colspan=”1″>

Hansel TT, Johnston SL og OPENSHAV PJ:mikrober og mucosale immunresponser i astma. Lancet.381:861–873. 2013. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI

ropspan=”1″>

Compalati E, Braido F og Canonica GV: Anupdate på allergenimmunterapi og astma. Curr Opin Pulm Med.20:109–117. 2014. Se Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI

ropspan=”1″ colspan=”1″>

Hespel C og Moser M: rolle af inflammatoriskdendritiske celler i medfødt og adaptiv immunitet. EUR J Immunol.42:2535–2543. 2012. Se artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI

ropan=”1″>

Brand A, S, Montgomery MK, Kostas SA, Driver SE og Mello CC: Potent og specifik genetisk interferens veddobbeltstrenget RNA i Caenorhabditis elegans. Natur.391:806–811. 1998. Google Scholar: PubMed / NCBI

rnspan=”1″ colspan= “1”>: Effekter af knoglemarv mesenkymale stamcellerpå CD4 + CD25 + regulatoriske T-celler og luftvejbetændelse hos astmatiske mus. Jong-Jong-Jong-Jong-Yan Jiu.12:9302–9305. 2008.(På Kinesisk).

	Locksley RM: astma og allergiskbetændelse. Celle. 140:777–783. 2010. Se Artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Holgate ST: medfødte og adaptive immunresponser i astma. Nat Med. 18:673–683. 2012. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Larch Larch m, Robinson DS og Kay AB: rollenaf T-lymfocytter i patogenesen af astma. J Allergi ClinImmunol. 111:450–464. 2003. Se Artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Lambrecht BN og Hammad H: rollen somdendritiske og epitelceller som master regulatorer af allergiskluftvejsbetændelse. Lancet. 376:835–843. 2010. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
td ropspan=”1″ colspan=”1″> Holt PG og Upham JV: rollen somdendritiske celler i astma. Curr Opin Allergi Clin Immunol. 4:39–44.2004. Se Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Lim TS, Goh JK, Mortellaro a, Lim CT,H. Krismerling GJ og Ricciardi-Castagnoli P: CD80 og Cd86differentielt regulere mekaniske interaktioner mellem T-celler medantigenpræsenterende dendritiske celler og B-celler. PLoS One.7:. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
td ropan=”1″> opløseligt CD86-protein i serumprøver af patienter med astma.Thorax. 59:870–875. 2004. Vis artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Van Rijt LS og Lambrecht BN: Dendritiskceller i astma: en funktion ud over sensibilisering. Clin Allergi.35:1125–34. 2005. Se artikel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Van Rijt LS, Vos N, Vilart M, Kleinjan a,Coyle AJ, Hoogstedet HC og Lambrecht BN: væsentlig rolle afdendritisk celle CD80/Cd86 Costimulation i induktion, men ikkeaktivering af Th2 effektorresponser i en musemodel af astma.J Allergi Clin Immunol. 114:166–173. 2004. Se Artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	effekter af mikroRNA-21 på interleukin 12 / signaltransducer og aktivator af transkription 4 signalvej i astmatiske mus. Cent Eur JImmunol. 39:40–45. 2014. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Gu, J, Yao Y og Chen å: effekt af RNA-interferens på CD80 og CD86-ekspression i knoglesmal-afledte murine dendritiske celler. Scand J Immunol. 64:588–594.2006. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Livak KJ og Schmittgen TD: analyse afrelative genekspressionsdata ved hjælp af realtids kvantitativ PCR og 2-kart ct−metoden. Metode. 25:402–408. 2001. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Fanta CH: astma. N Engl J Med.360:1002–1014. 2009. Se Artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Lambrecht BN og Hammad H: Lungedendritiskceller i respiratorisk virusinfektion og astma: fra beskyttelse tilimmunopatologi. Annu Rev Immunol. 30:243–270. 2012. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	se: astma fænotyper: Denevolution fra kliniske til molekylære tilgange. Nat Med.18:716–725. 2012. Google Scholar : Google Scholar : PubMed / NCBI
	Goyvaerts C, Dingemans J, de Groeve K,Heirman C, Van Gulck E, Vanham G, de Baetselier P, Thielemans K,Raes G og Breckpot K: målretning af humant antigen-præsentere cellsubsets. J Virol. 87:11304–11308. 2013. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Reise Sousa C: dendritiske celler i en matureage. Nat Rev Immunol. 6:476–483. 2006. Google Scholar : Google Scholar : PubMed / NCBI
	Gill MA: rollen af dendritiske celler iastma. J Allergi Clin Immunol. 129:889–901. 2012. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Shi JH, LI YG og LI TS: rollerne afdendritiske celler i antigenpræsentation og patogenesen afastma. Jeg Elsker Ham, Jeg Elsker Ham. 28:22–27. 2005.(InChinese). PubMed/NCBI
	Tong CK, Lun SV, Ko FV, Hui DS Andlam: øget ekspression af plasma-og celleoverfladekostimulerende molekyler CTLA-4, CD28 og CD86 hos voksne patientermed allergisk astma. Clin Immunol. 141:122–129. 2005.Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Bellou A og Finn PV: Costimulation:kritiske veje i den immunologiske regulering af astma. CurrAllergy Astma Rep. 5: 149-154. 2005. Se Artikel : Google Scholar: PubMed / NCBI
	Chen YK og Shi HS: CD28/CTLA-4-CD80 / Cd86og ICOS-B7RP-1 costimulerende vej i bronchial astma. Allergivenlig.61:15–26. 2006. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
td ropspan=”1″ colspan=”1″> Bieber T, Novak N, Herrmann N og Koch s:rolle af dendritiske celler i atopisk dermatitis: en opdatering. Clin RevAllergy Immunol. 41:254–258. 2011. Se Artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Novak n: en opdatering om humandendritiske cellers rolle hos patienter med atopisk dermatitis. J Allergi ClinImmunol. 129:879–886. 2012. Se Artikel: Google Scholar : PubMed / NCBI
	Lombardi V, Singh AK og Akbari O: Therole af costimulerende molekyler i allergisk sygdom og astma. IntArch Allergi Immunol. 151:179–189. 2010. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
td ropan=”1″ colspan=”1″> hang Y, Hu og Hu B: DC-derivedTSLP fremmer Th2 polarisering i LPS-primet allergisk luftvejbetændelse. EUR J Immunol. 42:1735–1743. 2012. Se Artikel: Google Scholar : PubMed/NCBI
	Crosby JR, Guha M, Tung D, Miller DA,Bender B, Condon TP, York-DeFalco C, Geary RS, Monia BP, Karras JGand Gregory SA: inhaleret CD86 antisense oligonukleotid SUPPRESSERPULMONAL inflammation og luftvejs Hyper-respons i allergiskmus. J Pharmacol Eksp Ther. 321:938–946. 2007. Se artikel: Google Scholar: PubMed/NCBI
	Ghafouri-Fard s: siRNA og cancerimmunoterapi. Immunterapi. 4:907–917. 2012. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
td rrspan=”1″ colspan=”1″> Gavrilov K og Saltsman masseødelæggelsesvåben: principper, udfordringer og strategier. Yale J Biol Med.85:187–200. 2012.PubMed / NCBI
	Yan VJ, SJ, SJ MM og Vu BL: effekt af eksogent cyklisk dimerisk guanosinemonophosphat på genekspression af Streptococcus mutans. Yan Jiu. 16:1451–1454. 2012.(På Kinesisk).
td rnspan=”1″ colspan=”1″> Lee CC, Huang HY og Chiang BL:Lentiviral-medieret interleukin-4 og interleukin-13 RNAinterference mindsker luftvejsinflammation og hyperresponsivitet.Hum Gene Ther. 22:577–686. 2011. Se Artikel : Google Scholar: PubMed/NCBI
	Li Y, Sun M, Cheng H, Li S, Liu L, Chiao H,Hua s og Lu J: Silencing IL-23 udtryk med en lille hårnål Rnabeskytter mod astma hos mus. Eksp Mol Med. 43:197–204. 2011.Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
	Vi JJ og Gillespie ME:lille-interfererende RNA-medieret identifikation og regulering af denternære SNARE kompleks medierende rbl-2H3 mastcelle degranulation.Scand J Immunol. 73:8–17. 2011. Se artikel: Google Scholar: PubMed / NCBI
td rrspan=”1″ colspan=”1″> Lu KS, McCoy KS, Hu JL, Hu UK og Chen HB:lille interfererende RNA rettet mod T-celle ig mucin-3 mindskerallergisk luftvejsinflammation og hyperresponsivitet. Betændelse.36:582–591. 2013. Se artikel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Darcan-Nicolaisen Y, Meinicke H, Fels G,Hegend O, Haberland A, K Larshl a, Loddenkemper C, Vitrath M, KubeS, Henke og Hamelmann e: Lille interfererende RNA modtranskriptionsfaktor STAT6 hæmmer allergisk luftvejsbetændelse og hyperreaktivitet hos mus. J Immunol. 182:7501–7508. 2009.Se artikel : Google Scholar: PubMed/NCBI
	Moriaki A, Inoue H, Nakano t, MatsunagaY, Matsuno Y, Matsumoto T, Fukuyama S, Kan-O K, Matsumoto K,Tsuda-Eguchi m, Et Al: t-cellebehandling med lille interfererende rnafor suppressor af cytokinsignalering 3 modulerer allergiske luftvejsresponser i en murin astmamodel. Am J Respir Celle Mol Biol.44:448–455. 2011. Se artikel : Google Scholar : PubMed/NCBI
	JH, Lu JJ, Guo, Ren T og LiangYJ: små interfererende RNA ‘ er, der er specifikke for milt tyrosinkinaseinhibit modning af dendritiske celler af astmatiske mus in vitro.Han Er En Af De Bedste. 8:487–491. 2009.(InChinese).