inducerbar clindamycinresistens i stafylokokker kan være forårsaget af opdaget ved Diskdiffusionsmetode ved anvendelse af clindamycin og erythromycin diske. D-test udføres ved diskdiffusion, hvor der placeres en 15-liter Erythromycin-disk i nærheden af en 2-liter Clindamycin-disk på en agarplade, der er inokuleret med et stafylokokisolat; pladen inkuberes derefter natten over.
en udfladning af inhiberingsområdet omkring Clindamycinskiven, der er proksimal i forhold erythromycindisken (der producerer et inhiberingsområde formet som bogstavet D) betragtes som et positivt resultat og indikerer, at erythromycin har induceret clindamycinresistens (en positiv “d-områdetest”). For Erythromycinresistente isolater kan induktionstest hjælpe laboratorier med at bestemme, om resultater for Clindamycin skal rapporteres som modtagelige (når induktionstesten er negativ) eller som resistente (når induktionstesten er positiv).
virkningsmekanisme for Erythromycin og Clindamycin og udvikling af resistens
Erythromycin (et makrolid) og clindamycin (et lincosamid) repræsenterer to forskellige klasser af antimikrobielle midler, der hæmmer proteinsyntese ved binding til 50S ribosomale underenheder af bakterieceller. I stafylokokker kan resistens over for begge disse antimikrobielle midler forekomme gennem methylering af deres ribosomale målsted. En sådan resistens medieres typisk af ERM-gener.
klinisk betydning af inducerbar Clindamycinresistens:
makrolid-lincosamid-streptogramin B (MLSB) resistens, som medieres af målsidemodifikationsmekanisme, resulterer i resistens over for Erythromycin, Clindamycin og streptogramin B. Denne mekanisme kan være
- konstitutiv, hvor rRNA-metylasen altid produceres,
Hvis in vitro-test udføres Staphylococcus aureus-isolater med konstitutiv resistens er resistente over for Erythromycin og Clindamycin. - eller kan induceres, hvor methylase kun produceres i nærvær af et inducerende middel (Bemærk: Erythromycin er en effektiv inducer af makrolid-lincosamid-streptogramin B (mlsb) resistens). Isolater med inducerbar resistens er resistente over for Erythromycin, men forekommer modtagelige for Clindamycin i rutinemæssig invitro-test.
klinisk betydning af inducerbar Clindamycinresistenstest (D-Test)
Clindamycin er et attraktivt middel til empirisk terapi for mistænkte S. aureus-infektioner på grund af dets fremragende farmakokinetiske og farmakodynamiske egenskaber. Kliniske fejl i clindamycinbehandling til behandling af MRSA-infektioner er dokumenteret for stammer, der var clindamycinfølsomme, men erythromycinresistente. Fejlene skyldtes inducerbar resistens over for clindamycin.
i sådanne tilfælde kan terapi med Clindamycin in vivo vælge for konstitutive ERM-mutanter, hvilket kan føre til klinisk svigt. Clindamycinresistens kan være konstitutiv eller inducerbar. Rutinemæssige antibiotiske følsomhedstest kan ikke identificere disse stammer. D (inducible clindamycin resistance) – testen anvendes til at detektere inducerbar clindamycinresistens.
Procedure for inducerbar Clindamycinresistens (D) Test:
- Forbered 0.5 McFarland standardsuspension af Erythromycinresistente Staphylococcus aureus isolater
- lav en græsplænekultur af bakterier i Muller Hinton Agar (MHA) plader.
- sæt clindamycin (2-lutg ) og Erythromycin (15-lutg ) skiver ca.15 mm fra hinanden (målt kant til kant).
- inkuber pladen i 16 til 18 timer ved 37oC
fortolkning af resultatet af D-Test
et klart, D-formet inhiberingsområde omkring Clindamycinskiven betegnes som D-fænotypen, der er mærket som D eller D+. Fire andre ikke-induktionsfænotyper (betegnet som negative, diset d-område, resistente og modtagelige ) observeres også i diskdiffusionsresultater