resistensmekanismen for Escherichia coli induceret af ampicillin i laboratoriet

introduktion

patogen Escherichia coli forårsager ofte diarre, sepsis og andre kliniske symptomer og er stadig en af de vigtigste tarmpatogener, der påvirker menneskers og dyrs sundhed. Ampicillin (AMP), et semisyntetisk Kurt-lactam-antibiotika, bruges i vid udstrækning til behandling af E. coli-infektion hos mennesker og husdyr, men for nylig er dens resistensrate steget.1-3 AMP virker på det aktive replikationsstadium af bakterier og hæmmer syntesen af bakteriecellevæggen. Bakterier modstår ofte sådanne antibiotika på følgende måder: koder for Kurt-lactamase, ændrer målproteinet i cellevæggen, reducerer permeabiliteten af den ydre membran og øger ekspressionen af lægemiddeludstrømningspumpe. Antibakterielle lægemidler bruges af dyr og spredes derefter til miljøet via udskillelse, hvilket ikke kun gør miljøet forurenet, men også bringer stor skade på menneskers sundhed og bæredygtig udvikling af avlsindustrien.4,5

Helgenomsekventering har vist sig at styre forebyggelse og kontrol af bakteriel resistens.6 enkelt nukleotidpolymorfisme (SNP) henviser hovedsageligt til DNA-sekvenspolymorfisme forårsaget af variationen af et enkelt nukleotid på det genomiske niveau, og resekventeringsanalysen for at screene de forskellige SNP ‘ er kan mere direkte studere lægemiddelresistens. Vi simulerede processen med kliniske antibiotika i organismer ved hjælp af metoden til AMP-laboratorieinduktion og udforskede forholdet mellem graden af lægemiddelresistens og mutationsstedet. Screening for ikke-synonymt enkelt nukleotidpolymorfisme (ikke-SNP) mellem lægemiddelresistente og modtagelige stammer for at forstå rollen som ikke-SNP i lægemiddelresistente stammer. Formålet med denne undersøgelse er at forstå loven og mekanismen for lægemiddelresistens af E. coli, give nye mål for udvikling af nye antibiotika, gøre rationel anvendelse af antibiotika og løse den multiple forekomst og behandling af multi-lægemiddelresistens af E. coli i klinisk praksis.

materialer og metoder

Bakterieisolater og reagens

E. coli-stammen anvendt i denne undersøgelse (E. coli 15743) blev isoleret fra en afføringsprøve fra en patient på et hospital i Henan-provinsen, Kina, i 2015. Karakterisering af denne stamme af Kirby Bauer (K-B) papirdiffusionsmetode viste, at stammen var følsom over for otte klasser af 20 antibiotika. E. coli ATCC 25922 blev brugt som kontrol for vores undersøgelse.

m-h bouillon medium og M-H fast medium (Oksoid selskab, UK), farmaceutiske følsomme papir (Binhe Binhe mikrobielle selskab, Kina), AMP standard produkter (Kinesisk drug identification Institute, Beijing, Kina), DNA-ekstraktion kit (Shanghai Laifeng Biotech company, Shanghai, Kina). Illumina hisek blev udført på Shanghai Lingen Biotechnology Co., Ltd.

E. coli anvendt i eksperimentet blev specifikt isoleret til denne undersøgelse. Undersøgelsen blev godkendt af Life Science Ethics Committee, og patienten underskrev også skriftligt informeret samtykke.

Induktionsproces

Minimum inhiberende koncentration (MIC) blev bestemt ved mikrobro fortynding metode.7-9 stammen af E. coli (isoleret fra klinisk og har MIC-værdi), der er følsom over for AMP, blev dyrket i MH fast medium, 37 liter C-kultur efter 18-24 timer, vælg en enkelt koloni i 8 mL M-H flydende medium til amplifikation af bakterier. Ovennævnte bakterieopløsning blev dyrket i M-H flydende medium indeholdende henholdsvis 1/2mic AMP, og koncentrationen af AMP blev kontinuerligt forøget under subkulturprocessen. Når koncentrationen af antibiotika nåede 16 liter / mL, blev 8 liter/mL forøget hver gang, og hver koncentration blev subkultureret to gange. Når værdien af MIC-ændringen af et lægemiddel var større end eller lig med fire gange MIC før og efter induktion, blev det anset for, at MIC-ændringen efter induktion havde betydelig betydning.10 dyrkningsmediet af M-H bouillon uden antibiotika blev anvendt som kontrol under hele processen.

Multilocus-sekvenstypning (MLST) af E. coli-stammer blev klassificeret af syv par husholdningsgener indeholdende adk, fumC, gyrB, icd, mdh, purA og recA.

følsomhedstest

Kirby Bauer-papirdiffusionsmetode blev brugt til at screene E. coli, som var følsom over for otte slags antibiotika, herunder aminoglycosider, penicilliner, cephalosporiner, tetracyclin, larr-lactamasehæmmere, carbamater, sulfonamider og kinoloner. De inducerede stammer blev gentaget under anvendelse af lægemiddelfølsomhedstest. Datatolkningen blev udført i overensstemmelse med retningslinjerne fra Clinical and Laboratory Standards Institute 2016.11

først inducerede vi E. coli-resistens over for AMP ved at dyrke E. coli med gradvist at øge koncentrationen af AMP (2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256 kg/mL). Efter at vi opnåede resistensstamme, sammenlignede vi resistensspektret for 20 antibiotika mellem den inducerede stamme (E. coli 15743-256, induceret ved 256 liter/mL) og den oprindelige stamme (E. coli 15743) ved at udføre lægemiddelfølsomhedstest. Bakteriesuspensionen blev spredt på en agarplade med et lille cirkulært stykke papir indeholdende forskellige antibiotika og dyrket ved 37 liter C i 16-20 timer. Antimikrobiel ringdiameter blev målt.

arbejdsgrupper og resekventeringsanalyse

stammerne ved MIC-værdier på henholdsvis 32 og 256 blev betegnet som henholdsvis E. coli 15743-32 og E. coli 15743-256. Helgenomanalyse blev udført på de primære følsomme stammer, og resekventering blev udført på inducerede resistente stammer. Resultaterne af resekvensering blev sammenlignet med resultaterne af det oprindelige kort. Screening af ikke-SNP ‘ er, der kan påvirke proteinfunktionen.

sekventering blev udført af Shanghai ling ‘ en Biotechnology Co. Ltd. (Shanghai, Kina). Illumina kombineret med tredje generations sekventeringsteknologi blev brugt til at fuldføre genomisk sekventering af stammerne i dette projekt.

RT-PCR

fjern det omvendte transkriberede DNA fra fryseren på 4 liter C, og forbered den ønskede koncentration af reagenset i henhold til instruktionerne. Tænd ABI Fast7500 instrument, set fra 95°C til 30 s, reagere til 40 cykler, 95°C i 3 s til 60°C til 30 s, og opløser kurven til 95°C i 15 sekunder, 60°C i 60 s, og fra 95°C til 15 s. Tilføj prøven til 8-rækken EP rør, tre replikere brønde pr prøve, og fjern boblerne ved centrifugering. Den gennemsnitlige CT-værdi af hver prøve blev registreret, efter at reaktionen var afsluttet. Det relative ekspressionsniveau for genet af interesse blev beregnet under anvendelse af 2−KRISTCT. (KROTCT = CT-værdi af målgenet-CT-værdi af det interne referencegen. Lp = eksperimentel prøve lprk – kontrolgruppe LPRK.)

Bioinformatik analyse

blev brugt til at analysere aminosyresekvensen af proteinet kodet før og efter genmutation og forudsige protein tertiær struktur.12,13

statistisk analyse

SPSS17.0 blev anvendt til simpel lineær regressionsanalyse, og regressionsligningen blev testet. Størrelsen af en test var 0,05 (liter=0,05).

resultater

resultater af Lægemiddelfølsomhedstest

vores data viste, at E. coli 15743 var følsom over for 20 forskellige antibiotika. Efter induktion, E. 15743-256 var resistent over for AMP, piperacillin, cefuroksimum, cefasolin, AMP/sulbactam, amoksicillin/clavulansyre, piperacillin/tobactam og atreonam, men stadig følsom over for de resterende 11 antibiotika (tabel 1, Bemærk, at formidlere også blev defineret som lægemiddelresistens). Vores resultater viste, at original følsom E. coli ikke kun var induceret resistent over for AMP, men også resistent over for en række andre antibiotika og blev multiresistent under induktion.

tabel 1 antibakteriel ringdiameter af Escherichia coli

forekomsten af lægemiddelresistens (bestemt af MIC-værdi) under induktion

for at studere kinetik af lægemiddelresistens dyrkede vi E. coli med stigende koncentration af AMP i forskellige perioder og målte mic ved hver koncentration som angivet i tabel 2. Regressionsanalyse blev udført på MIC-værdien og induktionstiden ved anvendelse af SPSS 17.0. Regressionsligningen var y=1,0435 LNH-0,7316. Den passende effekt af ligningen blev evalueret, R2=0,9605, P<0,05. MIC-værdien, der når 32 Liter/mL, er den kritiske værdi, og MIC-værdien steg hurtigere, før den nåede 32 liter/mL end efter (tabel 2).

tabel 2 MIC-værdien af E. coli 15743 over tid og induceret koncentration

i mellemtiden blev den del med MIC-værdi mindre end eller lig med 32 lengg / mL valgt til regressionsanalyse, og regressionsligningen var y=0,0358 * +1,2812. Den passende effekt af ligningen blev evalueret, R2=0,991, P<0,05. MIC-værdien af E. coli 15743 steg med stigningen i induktionskoncentration og induktionstid (Figur 1).

Figur 1 ændringen af MIC værdi over tid.Forkortelse: MIC, minimum hæmmende koncentration.

mlst-resultater

for at demonstrere, at den inducerede stamme (E. coli 15743-256) faktisk blev afledt af den oprindelige stamme (E. coli 15743), udførte vi mlst af over to stammer. Genomisk DNA blev ekstraheret ved hjælp af bakterielt DNA-ekstraktionssæt, PCR amplificeret og sekventeret af Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. Blast søgning af NCBI database viste, at disse to stammer har identiske, mlst type, adk-13, FUMC-363, gyrB-302, icd-97, mdh-17, purA-94, og recA-93. Vores data indikerer, at induktionsprocessen ikke var forurenet, og den resistente stamme E. coli 15743-256 blev afledt af den følsomme stamme E. coli 15743.

Helgenomanalyse

E. coli 15743 indeholdt 4408 gener, 22 rRNA og 85 tRNA. Gentætheden var 0,945 kb, GC-indholdet var 51.7%, genprocenten var 88,3%, den intergeniske regionlængde var 545.151, det intergeniske Region GC-indhold var 42,6%, og den intergeniske region tegnede sig for 11,7% af genomet. Karakteristika for E. coli 15743 genomer er opsummeret i figur 2. E. coli 15743 indeholdt ikke plasmider.

figur 2 det genomiske kort over E. coli 15743.Bemærkninger: den yderste cirkel af cirkelkortet er genomstørrelsen logo, hver skala er 0,1 Mp. Den anden og tredje cirkel er cd ‘er på de positive og negative kæder, og de forskellige farver indikerer forskellige COG-klassifikationer af cd’ erne. Den fjerde cirkel er rRNA eller tRNA. Den femte cirkel er GC-indholdet, og den udadvendte røde del indikerer, at GC-indholdet i regionen er højere end det gennemsnitlige GC-indhold i hele genomet. Jo højere topværdien angiver, desto større er forskellen fra det gennemsnitlige GC-indhold, og den indadvendte blå del indikerer, at GC-indholdet i regionen er lavt. For hele genomets gennemsnitlige GC-indhold indikerer en højere top en større forskel fra det gennemsnitlige GC-indhold. Den inderste cirkel er GC skæv værdi. Den specifikke algoritme er G – C eller G+C. Når værdien er positiv i biologisk forstand, har den positive kæde en tendens til at transkribere cd ‘ er. Når det er negativt, har den negative kæde en tendens til at transkribere cd ‘ er.Forkortelse: tandhjul, klynger af Ortologe grupperaf proteiner.

genomkortet af stammen omfatter distribution af gener på kæderne af retfærdighed og antisense, funktionel klassificering af klynger af Ortologe grupper af proteiner (COG), GC-indhold, genomø og homologe gener, som fuldt ud kan vise genomets egenskaber.

COG

den funktionelle klassificering af COG af E. coli 15743 viste, at de fleste gener var relateret til aminosyretransport og metabolisme, kulhydrattransport og metabolisme, energiproduktion og omdannelse, kun generel funktionsforudsigelse, uorganisk iontransport og metabolisme og cellehylsterbiogenese (figur 3).

figur 3 den funktionelle klassificering af COG of E. coli 15743.Forkortelse: tandhjul, klynger af Ortologe grupper af proteiner.

ikke-SNPs

for at bestemme, om der var en ændring i E. coli-genomet efter induktion af den oprindelige stamme, udførte vi en genom-bred sekventering af de inducerede resistente stammer (E. coli 15743-32 og E. coli 15743-256) og analyserede antallet af mutationer og stedet for mutationen.

sammenlignet med den oprindelige E. coli-stamme (E. coli 15743) var der ni ikke-SNP ‘er i to inducerede lægemiddelresistente stammer, herunder tre delte ikke-SNP’ er, som var til stede i generne orf00819, orf01200 og orf02235. Andre ikke-SNP ‘ er var til stede i generne orf01916, orf00490, orf03479, orf04094. Tre ikke-SNPs-mutationer forekom i orf03479-genet, og kun en SNP-mutation forekom i hvert af de resterende gener. Tre ikke-SNP ‘ er var i gener, der koder for cellemembranproteiner. Tre var i gener med ukendte funktioner. Den ene var relateret til transport og metabolisme af uorganisk ion, en var relateret til transkription, og en var relateret til signaltransduktionsmekanismer (tabel 3).

tabel 3 de ikke-SNPs analyseresultater E. coli 15743-32 og E. coli 15743-256

vores data viste, at der var fire ikke-SNP ‘ er i E. coli 15743-32, som var på fire gener. Der var otte ikke-SNP ‘ er i E. coli 15743-256, spredt over seks gener. Den funktionelle klassificering af tandhjul viste, at de fleste gener var relateret til aminosyretransport og metabolisme, kulhydrattransport og metabolisme, energiproduktion og konvertering, kun generel funktionsforudsigelse, uorganisk iontransport og metabolisme og cellehylsterbiogenese.

RT-PCR

re-sekventering af hele genomet E. coli 15743-32 og E. coli 15743-256, fluorescerende kvantitativ PCR-påvisning i realtid af konsensusgener. De gener, hvor ikke-SNP ‘ er forekommer, blev screenet, og E. coli 15743-32 og E. coli 15743-256 havde tre identiske gener (orf00819, orf01200, orf02235), og ekspressionsniveauerne af disse gener i hver generationsstamme er vist i henholdsvis figur 4a–C.

figur 4 resultater af mRNA-ekspression i forskellige generationer af stammer.

RT-PCR viste, at orf01200, orf00819, orf02235 gener viste høj ekspression i resistente stammer (E. coli 15743-32, E. coli 15743-64, E. coli 15743-128, E. coli 15743-256).

forudsigelse af proteinstruktur

den tertiære struktur ændres kun i proteiner kodet af gener orf01200 og orf04094, og de forudsagte resultater er vist i figur 5 og 6.

figur 5 den tertiære struktur af proteinet kodet af orf01200 gen.Bemærkninger: (a) før mutationen; (B) efter mutationen.

figur 6 den tertiære struktur af proteinet kodet af orf04094 gen.Bemærkninger: (a) før mutationen; (B), efter mutationen.

før mutationen af orf01200, 2hrt.1.A blev valgt som referenceskabelonprotein (figur 5a). Modelområdet for resterende infrastruktur var 2-1033, sekvensligheden var 0.59, og skabelonen dækning var 1,00. Efter mutationen af orf01200, 1 kg.1.A blev valgt som referenceskabelonprotein (figur 5b). Modelområdet for resterende infrastruktur var 7-1036, sekvensligheden var 0,59, og skabelondækningen var 1,00.

før mutationen af orf04094, 4cti.1.B blev valgt som referenceskabelonprotein (figur 6A). Modelområdet for resterende infrastruktur var 184-436, sekvensligheden var 0,56, og skabelondækningen var 0,59. Efter mutationen af orf04094, 3ib7.1.A blev valgt som referenceskabelonprotein (figur 6B). Modelområdet for resterende infrastruktur var 10-262, sekvensligheden var 0,33, og skabelondækningen var 0,91.

Diskussion

regressionsanalyse af MIC og induktionstid viste, at mic-værdien af stammen steg med stigningen i eksogent antibiotikatryk og induktionstiden. Liu et al, viste, at under induktionen af E. coli-resistens af imipenem steg MIC-værdien med tiden.14 selv når den inducerede koncentration nåede 128 gange MIC-værdien af den primære stamme, blev induktionen fortsat, og MIC-værdien fortsatte med at stige med induktion. I overensstemmelse med resultaterne af denne undersøgelse steg MIC-værdien af E. coli med tiden og induceret koncentration. Det viser, at hvis dosis ikke er begrænset, vil modstanden af stammen blive mere og mere alvorlig.

AMP blev induceret til E. coli 15743 i 63 timer (MIC nåede 32 Liter / mL), og MIC-værdien var otte gange den modtagelige stamme. Før dette steg MIC-værdien hurtigt, mens induktionen fortsatte, når den blev induceret til en MIC-værdi på 32 Liter/mL, og væksten i MIC-værdien faldt. I betragtning af bakterieresistens kan forekomme kort før man når lægemiddelresistenstærsklen (MIC-værdi på 32 Liter/mL). Efter at have nået den kritiske værdi, kan bakterierne være dovne og vokse langsomt, men MIC-værdien fortsætter med at stige. Det menes også, at denne stamme aktiverer visse resistensmekanismer og ændrer bakteriens lægemiddelresistensstatus.viste, at chloramphenicol inducerede følsom Shigella til den lægemiddelresistente tilstand, og dens lægemiddelresistensspektrum ville ændre sig.10 som et resultat var Shigella ikke kun resistent over for chloramphenicol, men også resistent over for andre typer antibiotika. I overensstemmelse med resultaterne af denne undersøgelse blev lægemiddelresistensspektret for E. coli forstærket efter induktion. Resultaterne viste, at E. Colibri 15743-256 var ikke kun resistent over for AMP, men også over for piperacillin, cefuroksimum, cefasolin, AMP/sulbactam, amoksicillin/clavulansyre, piperacillin/tassobactam og actreonam var også resistente. Det vurderes, at under induktionen af E. coli af AMP aktiveres ekspressionssystemet for AcrAB-TolC, eller at mere end et af de multiple udstrømningspumpesystemer aktiveres, og der er andre modstandsmekanismer end udstrømningsmekanismen.

den molekylære mekanisme for bakteriel resistens er stadig uklar. For at undersøge den specifikke molekylære mekanisme af E. coli-resistens over for AMP, bakteriel VGS-analyse blev udført. Sekventeringsresultaterne blev sammenlignet med referencesekvensen, og 20 SNP ‘er blev screenet fra sekvensen af E. coli 15743-32, hvoraf 4 var ikke-synonyme SNP’ er. Seksogtyve SNP ‘er blev screenet fra E. coli 15743-256-stammen, hvoraf otte var ikke-synonyme SNP’ er. Resistensniveauet for mutante stammer var højere end for ikke-mutante stammer, og der var en kvantitativ reaktion mellem punktmutationer og bakterieresistensniveauer, og flere genmutationer kunne forbedre bakteriernes resistens over for antibiotika.15 i overensstemmelse med resultaterne af denne undersøgelse var antallet af mutante gener i E. coli 15743-32 mindre end E. coli 15743-256, hvilket indikerer, at antallet af mutationer kan være relateret til graden af lægemiddelresistens, og jo flere mutationssteder, jo højere er graden af lægemiddelresistens.

efter sekventering blev de ikke-SNP ‘ er, der blev screenet i dette eksperiment, fordelt i generne orf00490, orf00819, orf01916, orf01200, orf02235, orf03479 og orf04094. Blandt dem er gener orf00490, orf00819 og orf01916 involveret i cellevægssyntese. Bemærkningerne i KEGG er fumaratreduktase underenhed D (frdD), celledeling protein ftsI (penicillin-bindende protein 3) og porin ydre membran protein OmpD, hhv. Undersøgelser har vist, at frd-genet koder for et FRD-gen for at katalysere omdannelsen mellem fumaratreduktase og succinatdehydrogenase.16 Det har også vist sig, at amplifikation af frdD-genet ved anvendelse af en plasmidvektor kan øge udbyttet af ravsyre.17,18 i kombination med denne undersøgelse anses det for, at frdD-genet er involveret i visse metaboliske veje, måske forbundet med AMP-resistens. I E. coli er de vigtigste mål for Kurt-lactam-antibiotika PBP1 (opretholdelse af cellemorfologi), PBP2 (opretholdelse af E. coli-spænding og stangform) og PBP3 (relateret til bakteriedeling). PBP3 er en kernekomponent i celledelingsproteiner, der katalyserer tværbindingen af cellevægspeptidoglycaner under celledeling.19-22 undersøgelser har vist, at nedregulering af OmpD-protein og OmpD-genekspression i bakterielle biofilm fører til nedsat cellemembranpermeabilitet og øget resistens over for antibiotika.23,24 i overensstemmelse med resultaterne af denne undersøgelse initierer OmpD-genmutationen en mekanisme for bakteriel resistens over for urin-lactam-antibiotika, og faldet i E. coli-cellemembranpermeabilitet er en af årsagerne til den øgede resistens over for AMP. Det vurderes, at disse ændringer i funktionen af proteiner kodet af gener involveret i cellevægssyntese påvirker bakteriernes resistens over for AMP.gener orf04094, orf01200, orf02235 er kommenteret i KEGG som osmotisk tryksensor histidinkinase (env), multi-drug efflukspumpegen (acrB) og multi-lægemiddelresistensprotein involveret i transkriptionel regulering (marR). I de senere år er den aktive effluksmekanisme hovedårsagen til bakteriens multiple lægemiddelresistens.25-27 Da det meste af spildevandssystemet transporterer substrater bredt, og mange aktive spildevandssystemer kan eksistere i de samme bakterier, kan dette system føre til bakteriel resistens over for forskellige antibakterielle lægemidler med helt forskellige strukturer, nemlig multipel resistens. I Marlen Adlers undersøgelse øgede mutationer i ftsI-genet alene ikke antibiotikaresistens, mens ftsi-og envsgenmutationer øgede mic af antibiotika flere gange. Cohen et al, demonstrerede, at funktionen af det inhiberende protein kodet af det muterede MarR-gen ville blive reduceret, og bakteriens virkning på antibiotikas multiple resistens var lille, når MarR-mutationen kun blev påvist.28 Merric et al, fandt ud af, at E. coli kun viste lave niveauer af multi-lægemiddelresistens, når MarR-genet blev muteret.29 resultaterne af denne undersøgelse viste, at flere gener samtidig blev muteret, og E. coli-resistens over for AMP steg.

Gen orf03479 er kommenteret som valin glycin repeat G (VgrG) protein i KEGG. Type VI-sekretionssystemet (T6SS) er et fagrelateret system, der findes i mange bakterielle patogener, såsom E. coli, Pseudomonas aeruginosaog Burkholderia cenocepacia. Effektorfaktorerne kan udskilles til den ekstracellulære af bakterier, og proteinsekretionssystemet er tæt forbundet med virulens af patogene bakterier. Vgrg-genmutation påvirker bakteriens toksicitet og lægemiddelresistens, men funktionen af glutamatvalin-gentagelsesprotein er stadig uklar.30 Denne undersøgelse vurderer, at VgrG-genet kan være forbundet med AMP-resistens, og dets mekanisme kræver yderligere undersøgelse.

Sammenfattende er TANDHJULSFUNKTIONEN af disse mutante gener relateret til oprindelsen af cellemembraner, transport og metabolisme af uorganiske ioner, transkriptions-og signaltransduktionsmekanismer. Undersøgelser har vist, at bakterier under antibiotikastress kan tage både aktivt forsvar og passivt forsvar for at sikre deres overlevelse.31 i passivt forsvar gør bakterier sig sovende, reducerer livets vitalitet og blokerer kombinationen af antibiotika og mål for at reducere drabseffekten af antibiotika. I aktivt forsvar øger de aktiviteten af efflukspumpe for at øge udstrømningen af antibiotika og reducere ophobningen af antibiotika i bakterier og derved reducere den dræbende virkning af antibiotika på bakterier. Denne undersøgelse antyder, at modstanden af E. coli til AMP er en kombination af aktive forsvarssystemer og passive forsvarssystemer. Lægemiddelresistens kan forekomme kort før den bakterielle MIC-værdi når lægemiddelresistenstærsklen. Generne frdD, ftsi, acrB, OmpD, marR, VgrG og env er forbundet med AMP-resistens. Disse undersøgelser vil bidrage til at forbedre den molekylære mekanisme af E. coli resistent over for Lars-lactam antibiotika, og give et forskningsgrundlag for forebyggelse og bekæmpelse af multiresistente bakterier og målene for nye antibiotika.