oversigt: med denne metode skal vi skabe en ren og forureningsfri sporefyldt sprøjte. Sprøjten fyldes med opvarmet og steriliseret vand og får lov til at køle af. Sporerne overføres derefter fra sporetryk i sprøjteopløsningen ved hjælp af et renset og desinficeret skudglas. Ved afslutningen af denne Tek har du oprettet en sporeopløsningssprøjte klar til brug i enhver mikroskopiapplikation.
bemærk: disse instruktioner er mest effektive, når de udføres i det mest sterile miljø, der er til rådighed. Den foretrukne metode indebærer at følge nedenstående trin, mens du arbejder i en ren og steril Handskekasse eller foran en laminær strømningshætte. Hvis du ikke ønsker at konstruere en handskerum, eller ikke har en, følgende trin er blevet udført med succes ved at arbejde på en grundigt rengjort og desinficeret bordplade. Liberal brug af spraydesinfektionsmiddel og fortyndet blegemiddelopløsning anbefales til rengøring og desinficering af arbejdsområdet.
nødvendige materialer:
tomme sterile sprøjter
to kvart (eller større) kogepotte
En flaske med 91% isopropylalkohol
flere papirhåndklæder
En lysere eller alkoholflamme
et skudglas
sterilt sporeprint
Procedure One: fremstilling af en steril sprøjte
1. Fyld din kogepotte halvvejs med tryk eller destilleret vand (brug destilleret vand, hvis dit ledningsvand indeholder højere niveauer af mineraler og kemikalier).
2. Kog vandet i gryden på højt i mindst ti minutter, dette skal være tilstrækkeligt til at sterilisere og rense vandet for alle bakterier, vira og skimmelsporer.
3. Tag din tomme sprøjte og fyld den med kogende vand. Lad det sidde i to minutter med varmt vand inde. (Hvis din sprøjte var sterilitetspakket, Spring trin 4 og 5 over).
4. Rens det varme vand fra sprøjten i en vask, ikke tilbage i gryden.
5. Gentag trin 3 og 4 to gange mere. Efter anden gang forlader varmt vand i sprøjten.
6. Anbring sprøjten på et køligt trækfrit sted, helst i en ren lynlåspose
7. Lad det afkøle i flere timer, før du fortsætter til Procedure to.
Procedure to: Overførsel af printsporer til Sprøjte
1. Rengør først dit arbejdsområde. Dette kan indebære at tørre alle arbejdsflader ned med en fortyndet blegemiddelopløsning og sprøjte området rigeligt med et desinfektionsmiddel som Lysol.
2. Læg følgende materialer i handskerummet eller på den rensede og sanatiserede arbejdsflade: skudglaset, dine afkølede sprøjter, flasken alkohol, et papirhåndklæde, dit tryk (stadig i lynlås baggie) og lighteren eller alkoholflammen.
3. Vask hænder med antibakteriel sæbe, inden du fortsætter videre.
4. Fold papirhåndklædet op i liter sektioner og blød et hjørne af det med alkoholen.
5. Med alkohol gennemblødt håndklæde tørre det indre af shot glas, væsentlige sterilisere overfladen, du er ved at bruge i overførslen. Lad skudglaset lufttørre, bør kun tage et par sekunder.
6. Fjern kanylebeskyttelsen fra den sterile sprøjte, og steriliser kanylen med flamme. Tag derefter dit alkohol gennemblødt papirhåndklæde og tør nålen af for yderligere at hjælpe med steriliseringen. Forsøg at undgå at lade nålen røre ved andre overflader, medmindre andet er anvist.
7.BEMÆRK: Det er vigtigt på dette tidspunkt at arbejde så hurtigt som muligt for at hjælpe med at bekæmpe chancerne for, at forurenende forme og bakterier falder ind i dit arbejdsområde og derved ødelægger din sprøjte.
8. Fjern udskriften fra dens opbevaringspose. Udfold det for at udsætte sporerne. Begynd let at skrabe, ved hjælp af sprøjtens nål, en del af udskriften i skudglaset. For en mellemstor udskrivning er det normalt tilstrækkeligt at skrabe et afsnit, der ikke er større end 1/5 af det samlede tryk.
9. Du vil have en lille mærkbar samling af sporer i skudglaset. Fjern nu ikke mere end halvdelen af vandet fra sprøjten ind i skudglaset, omrør sporerne let i opløsningen.
10. Sug sporevandopløsningen ind i sprøjten. Det kan være nødvendigt at fjerne noget mere vand i skudglaset og suge igen for at hjælpe med at fange alle sporer i sprøjten.
11. Når du har sporeopløsningen tilbage i sprøjten, skal du bemærke, at vandet indeni er blevet let tonet, og du kan se små klynger af sporer flyde i opløsningen. Dette er godt, du har afsluttet processen.
12. Steriliser nålen igen med det alkoholblødgjorte papirhåndklæde, udskift kanylebeskyttelsen og læg sprøjten tilbage i din rene lynlåspose.
13. Lad sprøjten sidde i mindst 12 timer, før den anvendes til mikroskopi eller podning til spiselige sorter. Jo ældre det anvendte tryk er, jo mere “dehydreret” bliver sporerne. For korrekt mikroskopiobservation eller spiring skal sporerne få lov til at rehydrere.