Einleitung
Die Co-Immunopräzipitation, kurz Co-IP, ist eine weit verbreitete Technik zur Identifizierung physiologisch relevanter Protein-Protein-Wechselwirkungen, indem zielproteinspezifische Antikörper verwendet werden, um indirekt Proteine einzufangen, die an dieses spezifische Zielprotein gebunden sind. Als Erweiterung von IP kann Co-IP nicht nur das primäre Ziel erfassen und reinigen, sondern auch andere Makromoleküle, die durch native Interaktionen an das Ziel binden. Der Unterschied zwischen IP und Co-IP steht im Mittelpunkt des Experiments. IP konzentriert sich auf das primäre Ziel, das den Antikörper bindet. Während Co-IP auf die sekundären Ziele abzielt, die mit den primären Proteinen interagieren, anstelle von Antikörpern. Nach der Immunpräzipitation werden auf den Kügelchen eingeschlossene Proteine gewaschen und eluiert, um gereinigte primäre und sekundäre Zielproteine zu erhalten. Diese Zielproteine können in verschiedenen Methoden charakterisiert werden, wie z.B. WesternBlot- und Massenspektrumanalyse unter Shotgun-Strategie, um Partnerprotein-IDs, Bindungsaffinitäten, Bindungskinetik und unentdeckte Funktionen des Primärproteins zu identifizieren.
Kritische Faktoren über Co-IP:
Als leistungsstarke Technik wird Co-IP regelmäßig von Biochemikern verwendet, um Protein–Protein-Wechselwirkungen zu untersuchen. Während die Co-IP-Methodik unkompliziert ist, ist die Identifizierung physiologischer Protein-Protein-Wechselwirkungen durch Co-IP-Reaktion aufgrund der Instabilität der Wechselwirkung, der unspezifischen Bindung an IP-Reagenzien und der Antikörperkontamination nicht einfach. Alle oben genannten Probleme können negative Auswirkungen auf den Nachweis von Protein-Protein-Wechselwirkungen haben.
Co-IP von Proteinkomplexen
Da Co-IP von Protein-Protein-Wechselwirkungen abhängt, um die gebundenen Proteine nachzuweisen, ist die Bindungsaffinität und Stabilität der physiologischen Wechselwirkungen während des gesamten Co-IP-Prozesses sehr wichtig. Unzureichende Bindungszeit und umfangreiche Waschschritte können die Bindungseffizienz verringern und zu einem Versagen des Nachweises der Proteininteraktion führen. Daher sind für Proteine, von denen vorhergesagt wird, dass sie keine Bindungsaffinität oder dynamische Wechselwirkungen aufweisen, eine Vorabstabilisierung von Protein-Protein-Wechselwirkungen erforderlich, beispielsweise können Vernetzungsprozesse vor der Co-IP durchgeführt werden.
Unspezifische Wechselwirkungen
Ein Bruch der Zellmembran und der Organellen bewirkt, dass eine große Menge an Proteinen, die durch die Grenze getrennt sind, in Kontakt kommt. Daher ist es unvermeidlich, dass unspezifische Wechselwirkungen, also falsch positive Wechselwirkungen, auftreten können, die die Datenanalyse stören. Dies ist besonders häufig bei Proteinen der Fall, die entfaltete oder flexible Regionen aufweisen, die relativ klebrig sind und andere Proteine unspezifisch binden. Möglichkeiten, solche Probleme noch einmal zu erleben, können die Vorreinigung von Lysat unter Verwendung von Primärantikörpern zur Entfernung unspezifischer Proteine und die Änderung der Ionenstärke des Puffers zur Verringerung der unspezifischen Bindung sein.
Creative Proteomics kann kundenspezifisches experimentelles Design anbieten und Co-IP-Parameter basierend auf den Bedürfnissen der Kunden verfeinern. Wir versprechen eine zuverlässige Co-IP-Analyse von Protein-Protein-Wechselwirkungen mit unseren erfahrenen Wissenschaftlern und Technikern.
Merkmale des Co-IP-Dienstes:
- Untersuchung der Wechselwirkungen zwischen Proteinen und Proteinkomplexen
- Überwachung der Dynamik der Proteininteraktion
- Untersuchung der Protein-Protein-Interaktion in einem nicht denaturierenden Zustand, der fast physiologisch ist
- Abbildung der interagierenden Domänen von Proteinen
Unser Co-IP-Dienst enthält:
- Versuchsdesign basierend auf Ihren spezifischen Projektanforderungen: Puffer, Beads, Antikörper usw.
- Optimierung der Parameter wie Bindungszeit
- Zelllyse, IP, Waschen & Elution
- WesternBlot/ Massenspektrometrie, abhängig von den Projektanforderungen
- Datenanalyse & Berichtslieferung
Bestellvorgang:
