Die Quantifizierung von zellsekretierten Molekülen, z. B. Zytokinen, ist von grundlegender Bedeutung für die Charakterisierung von Immunantworten. Zytokin-Capture-Assays, die gentechnisch veränderte Antikörper verwenden, um die sekretierten Moleküle an den sekretierenden Zellen zu verankern, werden häufig zur Charakterisierung von Immunantworten verwendet, da sie sowohl die empfindliche Identifizierung als auch die Wiederherstellung lebensfähiger reaktionsfähiger Zellen ermöglichen. Wenn die Zytokine jedoch von den sezernierenden Zellen wegdiffundieren, werden auch nicht sezernierende Zellen als antwortende Zellen identifiziert. Hier verkapseln wir Immunzellen in mikrofluidische Tröpfchen und führen In-Tröpfchen-Zytokin-Capture-Assays durch, um die Diffusion der sekretierten Zytokine zu begrenzen. Wir verwenden mikrofluidische Geräte, um einzelne natürliche Killer-NK-92-MI-Zellen und ihre Ziel-K562-Zellen schnell in mikrofluidische Tröpfchen einzukapseln. Wir führen In-Tröpfchen-IFN-γ-Capture-Assays durch und zeigen, dass NK-92 MI-Zellen Zielzellen in Tröpfchen erkennen und aktiviert werden, um IFN-γ abzusondern. Die Tröpfchenverkapselung verhindert die Diffusion von sekretierten Produkten in benachbarte Zellen und reduziert sowohl falsch positive als auch falsch negative Ergebnisse im Vergleich zu Tests ohne Tröpfchen drastisch. In einer Probe, die 1% True Positive enthält, reduziert die Verkapselung die Anzahl der true-positiven Zellen, die als Negative erscheinen, von 94% auf 2%; In einer Probe, die 50% true Positive enthält, wird die Anzahl der nicht stimulierten Zellen, die als Positive erscheinen, von 98% auf 1% reduziert. Nachdem Zellen aus den Tröpfchen freigesetzt wurden, bleibt das sekretierte Zytokin auf sekretierenden Immunzellen gefangen, was die FACS-Isolierung von Populationen ermöglicht, die für aktivierte Effektor-Immunzellen hoch angereichert sind. Die Tröpfchenverkapselung kann verwendet werden, um den Hintergrund zu reduzieren und den Nachweis jedes Einzelzellsekretionstests zu verbessern.