Was ist Verhoeff-van Giesons Färbung?
Ira Van Gieson beschrieb erstmals 1889 das Verhoeff-van Gieson (VVG) -Färbeprotokoll als Methode zur Bewertung von Kollagenfasern im Nervengewebe. Frederick Herman Verhoeff, ein amerikanischer Chirurg und Pathologe, modifizierte den Fleck 1908 als Methode, um Kollagen und andere Bindegewebe zu unterscheiden und insbesondere elastische Fasern hervorzuheben.
Was färbt es?
Elastische Fasern sind Bindegewebsfasern, die es dem Gewebe ermöglichen, sich zu dehnen, und sind beispielsweise in der Aorta reichlich vorhanden, wo sie diesem großen Blutgefäß Flexibilität verleihen. Sie sind auch in anderen Geweben vorhanden, die Flexibilität benötigen, wie Haut und Lunge.
Diese feinen elastischen Fasern können typischerweise nicht auf routinemäßigen Hämatoxylin- und Eosin (H&E) -gefärbten Gewebeschnitten gesehen werden, daher sind spezielle Flecken erforderlich, um sie hervorzuheben. Sie können mehr über H&E in diesen Artikeln aus dem Microscopy and Imaging Channel- Teil 1 lesen:Methode und Tipps, Teil 2: Rezepte und Materialien.
Obwohl es zahlreiche spezielle Färbungen zur Identifizierung elastischer Fasern gibt, wird VVG am häufigsten verwendet, da es schnell ist und eine intensive Färbung elastischer Fasern erzeugt.
Allgemeine Prinzipien der Färbung
VVG ist eine zweiteilige Kombinationsfärbung, die die Differenzierung einiger Bindegewebskomponenten in einem Gewebe ermöglicht, die durch H&E-Färbung:
Verhoeff-Färbekomponente: eine Eisen-Hämatoxylin-Färbung, die für elastische Fasern spezifisch ist. Es bildet starke Bindungen mit Elastin, dem Hauptbestandteil des elastischen Bindegewebes.
van Gieson-Färbekomponente: ein Gegenfärbemittel, das spezifisch für Kollagen ist. Es wurde nach dem amerikanischen Bakteriologen Ira van Gieson benannt und besteht aus zwei Säurefarbstoffen – Pikrinsäure und saurem Fuchsin.
Die Technik beinhaltet die Färbung der Gewebeprobe mit einer Hämatoxylinfärbung aus Eisenchlorid und Jod und umfasst zwei Hauptschritte:
(1) Überfärbung: Dieser Schritt beinhaltet einen Komplex aus Hämatoxylin–Eisenchlorid–Jod. Die beiden letztgenannten Komponenten wirken als Beizmittel, um den Hämatoxylinfleck im Gewebe zu fixieren, und wirken auch als Oxidationsmittel, um Hämatoxylin in Hämatein umzuwandeln. Der Färbemechanismus beinhaltet wahrscheinlich die Bildung von Wasserstoffbrückenbindungen zwischen dem Hämatoxylin und dem Gewebe, obwohl die Besonderheiten dieser Reaktion nicht gut bekannt sind. Da Elastin eine starke Affinität zum Eisen-Hämatoxylin-Komplex im Fleck hat, hält es den Farbstoff länger als andere Gewebekomponenten. Elastin bleibt daher auch nach Entfärbung anderer Gewebeelemente gefärbt.
(2) Differenzierung: dieser Schritt verwendet überschüssiges Eisenchlorid-Beizmittel, um den Gewebe-Beizmittel-Farbstoff-Komplex abzubauen. Natriumthiosulfat wird verwendet, um überschüssiges Jod zu entfernen, und der Van Gieson-Gegenfleck wird verwendet, um einen Kontrast zum Hämatoxylin-Fleck zu erzeugen. Der Farbstoff wird von dem großen Beizmittelvolumen in der Differenzierungslösung angezogen und aus dem Gewebe entfernt. Das elastische Gewebe hingegen hat die stärkste Affinität zur Eisenkomponente des Flecks.
Folglich ist das Endprodukt der Reaktion so, dass elastische Fasern und Zellkerne durch die Verhoeff-Komponente schwarz gefärbt werden. Kollagen und Muskel werden durch den van Gieson-Gegenfleck rot gefärbt, was auch zu einer Gelbfärbung des Zellzytoplasmas und anderer Gewebekomponenten führt.
Wer verwendet Van-Gieson-Beize?
Dieser Fleck wird sowohl für diagnostische als auch für Forschungszwecke verwendet.
In diagnostischen Labors wird VVG verwendet, um das Vorhandensein oder Fehlen elastischer Fasern in Geweben zu identifizieren. Zum Beispiel können Pathologen es verwenden, um den Verlust von elastischem Gewebe in der Lunge bei Patienten mit Emphysem und Verdünnung und Verlust von elastischen Fasern in Blutgefäßen von Patienten mit Arteriosklerose zu demonstrieren.In ähnlicher Weise können Forscher, die eine dieser Arten von Krankheiten untersuchen, auch routinemäßig VVG-gefärbte Gewebeschnitte untersuchen, um das Vorhandensein oder Fehlen elastischer Fasern in Geweben von Interesse festzustellen. Andere Forscher können den Fleck einfach verwenden, um Bindegewebsfasern in Geweben von Interesse zu unterscheiden.
Wie verwenden Sie den Verhoeff-van-Gieson-Farbstoff in Ihrem Labor?
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