Die Zona pellucida ist eine azelluläre Hülle, die die Plasmamembran ausgewachsener Säugetier-Eizellen umgibt und die führt eine Vielzahl wichtiger Funktionen während der Oogenese, Befruchtung und Präimplantationsentwicklung aus. In dieser Untersuchung wurden die Proteine der Zona pellucida der Maus-Eizelle identifiziert und charakterisiert, indem Zonae pellucidae einzeln aus ausgewachsenen Eizellen mit mundoperierten Mikropipets isoliert wurden. Verschiedene morphologische und biochemische Kriterien wurden verwendet, um die Reinheit der isolierten Zonae pellucidae zu beurteilen, und in den meisten Fällen wurde festgestellt, dass sie praktisch frei von Kontamination durch andere Oozytenproteine waren. Es wurde festgestellt, dass jede Zona pellucida 4 enthält.8 ng Protein, das 80% oder mehr des Trockengewichts der Zona pellucida und etwa 17% des Gesamtproteins der Eizelle ausmacht. Elektrophoretische Analysen von nur fünf isolierten Zonae pellucidae, die mit diazotierter Iodosulfanilsäure behandelt wurden, zeigten das Vorhandensein von nur drei radioaktiv markierten Proteinen, die als ZP1, ZP2 und ZP3 bezeichnet wurden. Die gleichen drei Proteine wurden durch Coomassie-Blaufärbung identifiziert, als eine große Anzahl isolierter Zonae pellucidae (ungefähr 750) einer SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese unterzogen wurden. Diese drei Proteine wandern als breite Banden auf SDS-Polyacrylamidgelen, im Einklang mit ihren Glykoproteinen, mit scheinbaren Molekulargewichten von 200.000 (ZP1), 120.000 (ZP2) und 83.000 (ZP3). Die gleichen Proteine wurden radioaktiv markiert, wenn intakte Oozyten mit diazotierter iodosulfanilsäure behandelt wurden, einem Reagenz, das die Plasmamembran der Oozyten nicht durchdringt, oder wenn isolierte Zonae pellucidae mit 3H-markiertem 1-Dimethylaminonaphthalin-5-sulfonylchlorid behandelt wurden. Ergebnisse der Aminosäureanalyse und der hochauflösenden zweidimensionalen Elektrophorese der einzelnen Proteine legen nahe, dass jedes Protein eine einzigartige Polypeptidkette darstellt. Die Proteine ZP1, ZP2 und ZP3 machen etwa 36, 47 bzw. 17% des Gesamtproteins der Zona pellucida aus. In Gegenwart von Reduktionsmitteln, die eine Auflösung der Zona pellucida bewirken, wird ZP1 in eine Spezies umgewandelt, die mit einem scheinbaren Molekulargewicht von 130.000 wandert, was darauf hindeutet, dass es als durch Disulfidbindungen stabilisiertes Oligomer im nicht reduzierten Zustand vorliegt. Die Ergebnisse dieser Experimente werden im Hinblick auf die Eigenschaften der Zona pellucida vor und nach der Befruchtung diskutiert und mit Ergebnissen verglichen, die mit vitellinen Hüllen von Eiern von Nicht-Säugetierarten erhalten wurden.